茯苓總三萜免疫抑制及誘導人結腸癌RKO細胞凋亡的研究.pdf

1、南方醫(yī)科大學2013級碩士學位論文茯苓總三萜免疫抑制及誘導人結腸癌RKO細胞凋亡的研究StudyofimmunosuppressiveactivityandapoptosisinducingeffectoftotaltriterpenoidsfromPoriaCOCOSonhumancolorectalcarcinomaRK0cells課題來源：橫向合作項目學位申請人導師姓名專業(yè)名稱培養(yǎng)類型培養(yǎng)層次所在學院答辯委員會主席答辯委員會成員林

2、嘉雷林生教授藥理學學術型碩士研究生藥學院劉培慶教授徐江平教授葉春玲教授李曉娟教授劉利紅教授2016年5月23日廣州I摘要誘導小鼠脾細胞產(chǎn)生細胞因子(IL一2，IFN—y)的影響以及茯苓總三萜對LPS誘導小鼠脾細胞產(chǎn)生抗體的影響。31茯苓總三萜體內(nèi)對小鼠免疫功能及大鼠免疫病理模型的影響：采用兔紅細胞免疫小鼠產(chǎn)生血清溶血素(IgM)，之后用分光光度法測定小鼠溶血素的變化。ELISA法測定其對血清IL4的影響。通過測定茯苓總三萜對小鼠遲發(fā)型超

3、敏反應(DTH)所造成的耳廓腫脹度以及觀察給藥后胸腺及脾臟指數(shù)的變化來研究其對細胞免疫功能的影響。在大鼠佐劑性關節(jié)炎模型中，采集給藥后大鼠佐劑性關節(jié)炎模型關節(jié)炎指數(shù)、足趾腫脹度、體重等參數(shù)，評估其對自身免疫性疾病的治療作用。41茯苓總三萜誘導人結腸癌RKO細胞凋亡的研究：首先將RKO細胞接種于96孔板，經(jīng)茯苓總三萜處理后，MTT法檢測細胞的增殖活力；然后，接種RKO細胞于6孔板，茯苓總三萜處理后，DAPI染色觀察細胞核形態(tài)學變化，JC一

4、1染色觀察細胞線粒體跨膜電位變化，Western印跡法檢測Bax、Bcl2、線粒體細胞色素C(CytC)的含量，酶促反應顯色法檢測caspase9和caspase3的活性，評估其凋亡誘導作用及機制。實驗結果：111009茯苓粉末，經(jīng)提取分離，醇提物平均產(chǎn)量3239，乙酸乙酯提取物平均產(chǎn)量13969。平均產(chǎn)率分別為323％和127％。21除了低濃度茯苓總三萜(1099／mL)對混合淋巴細胞反應的抑制效果不明顯外，10lag／mL以上濃度茯

5、苓總三萜(20、40、8099／mL)均能顯著抑制混合淋巴細胞培養(yǎng)的增殖反應(代謝活力)，與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義，且有濃度依賴趨勢。31ConA可以明顯促進脾細胞的代謝活力，低濃度茯苓總三萜(1099／mL)雖然有輕微抑制ConA誘導的小鼠脾細胞增殖反應的趨勢，但與ConA組比較差異無統(tǒng)計學意義，而1099／mL以上濃度(20、40、8099／mL)均可以顯著抑制ConA誘導的小鼠脾細胞增殖反應，且有濃度依賴趨勢。41流式細胞術檢