移植靜脈橋重塑中PCNA配體蛋白研究.pdf

1、目的：尋找移植靜脈重塑中PCNA的配體蛋白。
　　方法：我們在前期實驗通過免疫組化和Western-blotting等發(fā)現(xiàn)PCNA的表達在術后1d呈最低值，術后7d呈峰值。證實了移植靜脈橋在術后1d凋亡顯著，在術后7d增殖明顯，因此我們選擇術后1d、術后7d和正常靜脈組，建立動物模型，在術前、術后1d和術后7d取出標本，通過PCNA抗體免疫沉淀，獲得生理條件下與PCNA相互作用的蛋白質(zhì)，再用質(zhì)譜定量分析技術對PCNA的配體蛋白進行

2、差異分析，尋找特異性靶蛋白，并進行驗證。
　　結(jié)果：通過質(zhì)譜分析共鑒定蛋白質(zhì)組數(shù)1238個，肽段數(shù)5840個。蛋白質(zhì)顯著性分析發(fā)現(xiàn)與正常靜脈組相比術后1d和術后7d差異蛋白數(shù)分別為30個和37個，術后1d和術后7d差異蛋白數(shù)為29個。術后1d和術后7d差異表達蛋白GO富集分析前15個注釋中，氮代謝合成、細胞刺激反應富集度較高。KEGG富集度分析術后1d和術后7d中14-3-3蛋白主要集中在PI3K-AKT信號通路、Focal ad

3、hesion通路。我們通過Western-blotting驗證發(fā)現(xiàn)，術后1d14-3-3γ表達增加，術后7d14-3-3γ表達減少，但高于正常對照組，14-3-3γ在術后1d表達明顯增加，與急性損傷早期細胞修復有關，術后7d表達下降，與細胞急性損傷逐漸恢復，并進入增殖期有關。免疫熒光實驗示14-3-3γ在術后1d表達呈高峰，術后7d、14d表達下降，但高于正常對照組，術后28d表達呈低水平，低于正常對照組。我們的免疫熒光實驗證實了在術后