移植靜脈橋重塑中PCNA配體蛋白研究.pdf

1、目的：尋找移植靜脈重塑中PCNA的配體蛋白。
　　方法：我們?cè)谇捌趯?shí)驗(yàn)通過(guò)免疫組化和Western-blotting等發(fā)現(xiàn)PCNA的表達(dá)在術(shù)后1d呈最低值，術(shù)后7d呈峰值。證實(shí)了移植靜脈橋在術(shù)后1d凋亡顯著，在術(shù)后7d增殖明顯，因此我們選擇術(shù)后1d、術(shù)后7d和正常靜脈組，建立動(dòng)物模型，在術(shù)前、術(shù)后1d和術(shù)后7d取出標(biāo)本，通過(guò)PCNA抗體免疫沉淀，獲得生理?xiàng)l件下與PCNA相互作用的蛋白質(zhì)，再用質(zhì)譜定量分析技術(shù)對(duì)PCNA的配體蛋白進(jìn)行

2、差異分析，尋找特異性靶蛋白，并進(jìn)行驗(yàn)證。
　　結(jié)果：通過(guò)質(zhì)譜分析共鑒定蛋白質(zhì)組數(shù)1238個(gè)，肽段數(shù)5840個(gè)。蛋白質(zhì)顯著性分析發(fā)現(xiàn)與正常靜脈組相比術(shù)后1d和術(shù)后7d差異蛋白數(shù)分別為30個(gè)和37個(gè)，術(shù)后1d和術(shù)后7d差異蛋白數(shù)為29個(gè)。術(shù)后1d和術(shù)后7d差異表達(dá)蛋白GO富集分析前15個(gè)注釋中，氮代謝合成、細(xì)胞刺激反應(yīng)富集度較高。KEGG富集度分析術(shù)后1d和術(shù)后7d中14-3-3蛋白主要集中在PI3K-AKT信號(hào)通路、Focal ad

3、hesion通路。我們通過(guò)Western-blotting驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)，術(shù)后1d14-3-3γ表達(dá)增加，術(shù)后7d14-3-3γ表達(dá)減少，但高于正常對(duì)照組，14-3-3γ在術(shù)后1d表達(dá)明顯增加，與急性損傷早期細(xì)胞修復(fù)有關(guān)，術(shù)后7d表達(dá)下降，與細(xì)胞急性損傷逐漸恢復(fù)，并進(jìn)入增殖期有關(guān)。免疫熒光實(shí)驗(yàn)示14-3-3γ在術(shù)后1d表達(dá)呈高峰，術(shù)后7d、14d表達(dá)下降，但高于正常對(duì)照組，術(shù)后28d表達(dá)呈低水平，低于正常對(duì)照組。我們的免疫熒光實(shí)驗(yàn)證實(shí)了在術(shù)后