Wnt5a在自體移植靜脈重塑中表達變化的研究.pdf

1、目的：
　　 動脈硬化閉塞性疾病(Arteriosclerotic disease，AD)是當(dāng)今世界上致死致殘的首要原因之一，尤其近年來在我國發(fā)生率呈逐年上升的趨勢。靜脈旁路移植是治療此類引起心臟、肢體等器官缺血疾病的重要方法，而術(shù)后發(fā)生再狹窄是影響手術(shù)近遠期效果的最重要原因。血管平滑肌細胞(Vascular smooth muscle cell，VSMC)的無序增殖是再狹窄形成的主要原因之一，而VSMC的增殖依賴于細胞增殖周期

2、的調(diào)控。Wnt信號通路不僅在動物胚胎生長發(fā)育中有很多生物學(xué)意義，而且在細胞的增值、極化遷移和代謝等方面有著重要的作用。國內(nèi)外已有大量研究證實Wnt家族蛋白Wnt5a與細胞的增殖、遷移等作用密切相關(guān)。本文旨在檢測Wnt5a在自體移植靜脈中表達水平的變化，探討Wnt5a是否與血管重塑過程中血管內(nèi)膜及中膜增殖的發(fā)生相關(guān)。
　　 方法：
　　 建立大鼠頸靜脈-腹主動脈移植模型，術(shù)后7、14、28天切取移植靜脈，取對側(cè)正常靜脈作為

3、對照。應(yīng)用HE染色方法觀察正常靜脈、靜脈移植術(shù)后7、14、28天靜脈的組織結(jié)構(gòu)并測量各組靜脈內(nèi)膜、中膜厚度;免疫組織化學(xué)染色方法及Westem-blot技術(shù)檢測Wnt5a蛋白在正常靜脈、靜脈移植術(shù)后7、14、28天靜脈中的表達水平;Real-time PCR技術(shù)檢測Wnt5a mRNA在正常靜脈、靜脈移植術(shù)后7、14、28天靜脈中的表達水平。
　　 結(jié)果：
　　 1、組織學(xué)檢查結(jié)果
　　 HE染色顯示:正常靜脈內(nèi)

4、膜覆蓋著單層內(nèi)皮細胞，中膜只有2～3層VSMC;靜脈移植術(shù)后7、14及28天，細胞增殖，血管壁增厚，新生內(nèi)膜增厚，分別為正常靜脈的(3.24±0.53)、(7.66±0.37)和(12.54±0.72)倍。免疫組化染色發(fā)現(xiàn):正常靜脈中Wnt5a陽性細胞極少，移植術(shù)后7天新生內(nèi)膜中Wnt5a陽性細胞增多，14天及28天新生內(nèi)膜及中膜中出現(xiàn)大量Wnt5a陽性細胞。正常靜脈、術(shù)后7、14及28天移植靜脈Wnt5a陽性細胞百分比分別為(4.67

5、±0.21)％、(20.34±0.26)％、(35.25±0.20)％和(57.24±0.52)％，術(shù)后7、14及28天與正常對照靜脈相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。
　　 2、Westem-blot檢測結(jié)果
　　 Western-blot檢測結(jié)果:正常靜脈中有少量Wnt5a蛋白表達，而在術(shù)后7、14及28天的移植靜脈中Wnt5a蛋白大量表達，分別為正常靜脈的2.03、5.71及8.17倍。術(shù)后Wnt5a蛋白表達水

6、平隨著時間點的延長而逐漸增加，與免疫組織化學(xué)結(jié)果趨勢相一致。
　　 3、Real-time PCR檢測結(jié)果
　　 Real-time PCR檢測結(jié)果顯示:正常靜脈中有少量Wnt5a mRNA的表達，而在術(shù)后7、14及28天的移植靜脈中Wnt5a mRNA大量表達，分別為正常靜脈的3.56、8.44及16.87倍。術(shù)后28天的表達量高于術(shù)后7天及14天的表達量，與蛋白表達趨勢一致。
　　 結(jié)論：
　　 1、