流體剪切力對(duì)牙周膜成纖維細(xì)胞分泌COX-2的影響.pdf

1、目的:
　　探索對(duì)體外培養(yǎng)的人牙周膜成纖維細(xì)胞(human periodontal ligament fibroblast，HPDLF)施加不同轉(zhuǎn)速及時(shí)間的流體剪切力（fluid shear stress，F(xiàn)SS)，對(duì)其合成環(huán)氧合酶2（cyclooxygenase2，COX-2)的影響，初步探討兩因素與HPDLF分泌COX-2關(guān)系。
　　材料與方法:
　　用高血清結(jié)合改良組織塊酶消化法培養(yǎng)獲得HPDLF，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行純化

2、及鑒定后，選用5-8代HPDLF進(jìn)行體外加力實(shí)驗(yàn)。建立體外FSS加載裝置系統(tǒng)，分別對(duì)細(xì)胞加載0rpm、5rpm、8rpm、12rpm、15rpm轉(zhuǎn)速的FSS1、2、6h，使用免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)細(xì)胞合成COX-2蛋白量的變化。
　　結(jié)果:
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析表明加力轉(zhuǎn)速、加力時(shí)間以及轉(zhuǎn)速與時(shí)間的交互作用對(duì)細(xì)胞合成COX-2均有影響（P值均<0.001），當(dāng)不加載力時(shí)（0rpm），灰度值=250,測(cè)定蛋白為陰性表達(dá)。當(dāng)不考慮加力

3、轉(zhuǎn)速因素時(shí)，不同時(shí)間點(diǎn)灰度值存在差異（P<0.001），加載1h時(shí)灰度值開始呈現(xiàn)減小趨勢(shì)，加載2h時(shí)灰度值最低，而6h的灰度值最高（P<0.001）。當(dāng)不考慮時(shí)間因素時(shí)，不同轉(zhuǎn)速灰度值存在差異（P<0.001），加載5rpm時(shí)灰度值開始降低，當(dāng)轉(zhuǎn)速增加至12rmp時(shí)灰度值最低，再上升到15rpm時(shí)灰度值再次升高。從兩因素分別來(lái)看，提示當(dāng)加力轉(zhuǎn)速及時(shí)間在一定范圍內(nèi)時(shí)，測(cè)定蛋白陽(yáng)性表達(dá)量與之呈正相關(guān)，細(xì)胞形態(tài)趨于正常；當(dāng)超出一定范圍時(shí)，蛋白

4、陽(yáng)性表達(dá)量與之呈負(fù)相關(guān)，細(xì)胞呈現(xiàn)非生理正常形態(tài)。當(dāng)同時(shí)考慮雙因素變化時(shí)（P值均<0.001），轉(zhuǎn)速為12rmp、時(shí)間為2h的灰度值最低。提示對(duì)HPDLF加載的FSS，其加載轉(zhuǎn)速及時(shí)間在一定范圍內(nèi)時(shí)，測(cè)定蛋白的表達(dá)量與之呈正相關(guān)，當(dāng)超出細(xì)胞生理承受范圍時(shí)，蛋白表達(dá)量與之呈負(fù)相關(guān)。在本實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)加載12rpm的FSS，2h時(shí)，COX-2蛋白的表達(dá)量達(dá)到峰值。
　　結(jié)論:
　　體外加載FSS可影響HPDLF分泌COX-2蛋白量的表