肝癌細(xì)胞上清液促進(jìn)成纖維細(xì)胞表達(dá)COX-2和HGF的研究.pdf

1、目的:觀察小鼠肝癌細(xì)胞上清液對成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化、增殖的影響及環(huán)氧合酶-2(COX-2)、肝細(xì)胞生長因子(HGF)表達(dá)水平變化的影響。探討成纖維細(xì)胞是否可以用來解決移植后肝細(xì)胞長期生存率低這一難題。
　　方法:MTT法檢測普通培養(yǎng)液、含有小鼠肝癌細(xì)胞上清液的條件培養(yǎng)液以及含有轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β1)的培養(yǎng)液對成纖維細(xì)胞增殖情況的影響，用RT-PCR以及免疫組織化學(xué)法及檢測在不同培養(yǎng)液培養(yǎng)下，成纖維細(xì)胞的α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-S

2、MA)、COX-2及HGF的mRNA及蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果:MTT法的結(jié)果顯示條件培養(yǎng)液及含TGF-β1的培養(yǎng)液對成纖維細(xì)胞增殖有一定的促進(jìn)作用，但條件培養(yǎng)液的促進(jìn)作用更強(qiáng)。RT-PCR的結(jié)果顯示條件培養(yǎng)液以及含TGF-β1的普通培養(yǎng)液比普通培養(yǎng)液更有利于成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化為以α-SMA為標(biāo)志的肌成纖維細(xì)胞，并能維持表型穩(wěn)定;且能促進(jìn)肌成纖維細(xì)胞穩(wěn)定的表達(dá)COX-2及HGF。在第3天時(shí)α-SMA的表達(dá)達(dá)到最高峰，并在第3天后表達(dá)穩(wěn)

3、定。COX-2、HGF在第5天表達(dá)達(dá)到最高峰，并保持穩(wěn)定。但普通培養(yǎng)液中的成纖維細(xì)胞不表達(dá)COX-2、HGF。
　　結(jié)論:小鼠肝癌細(xì)胞上清液能有效、穩(wěn)定地使成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化成為穩(wěn)定表達(dá)COX-2、HGF的肌成纖維細(xì)胞。成纖維細(xì)胞只有在轉(zhuǎn)分化后才能表達(dá)COX-2、HGF，而且成纖維細(xì)胞在肝癌細(xì)胞上清液的作用下增殖明顯，表達(dá)COX-2、HGF的水平較高。以上結(jié)果為將來成纖維細(xì)胞聯(lián)合肝細(xì)胞移植來提高移植后肝細(xì)胞長期生存率奠定了理論基礎(chǔ)。