香煙煙霧冷凝物對肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞分化的影響.pdf

1、目的:
　　香煙煙霧中含有許多有害的化學(xué)物質(zhì)，是多種疾病的重要誘發(fā)因素之一，被公認(rèn)為是引起肺間質(zhì)疾病的主要危險(xiǎn)因素。香煙煙霧相關(guān)肺間質(zhì)性疾病的分子機(jī)制尚不清楚，臨床上肺間質(zhì)纖維化也缺乏有效的治療方法。近年來關(guān)于香煙煙霧對肺成纖維細(xì)胞分化和增殖的影響機(jī)制受到人們的關(guān)注。本實(shí)驗(yàn)中使用的WI-38細(xì)胞為體外培養(yǎng)的人胚肺二倍體成纖維細(xì)胞，用不同濃度的香煙煙霧冷凝物(Cigarette smoke condensate,CSC)分別對轉(zhuǎn)化生

2、長因子β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）誘導(dǎo)下的成纖維細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)，通過檢測細(xì)胞α-平滑肌肌動蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA)的含量及吸光度值來反映CSC對肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞分化進(jìn)程及增殖的影響,目的在于探討香煙煙霧參與肺間質(zhì)相關(guān)疾病的可能機(jī)制。
　　方法:
　　體外培養(yǎng)人胚肺成纖維細(xì)胞來源的WI-38細(xì)胞，取對數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。香煙煙

3、霧冷凝物的制備是參考Carp and Janoff[1]最早使用的某種特殊裝置來實(shí)現(xiàn)的。通過這個(gè)裝置完成兩支香煙的抽吸，待煙霧在培養(yǎng)基中溶解，調(diào)整合適的酸堿度，除去多余的大顆粒和細(xì)菌，根據(jù)實(shí)驗(yàn)分組用培養(yǎng)基稀釋至若干濃度組，原則上用于實(shí)驗(yàn)的時(shí)間應(yīng)控制在30min內(nèi)。本實(shí)驗(yàn)首先嘗試應(yīng)用0％、2.5%、5%、7.5%、10%、12.5%濃度的香煙冷凝物培對培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)，每組均加入等量5μg·L-1的TGF-β1。通過顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，

4、ELISA法檢測細(xì)胞中α-SMA的水平。依據(jù)其結(jié)果選定合適的濃度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分組,實(shí)驗(yàn)分為空白對照組、5%CSC組、7.5%CSC組、10%CSC組.采用MTT法測定細(xì)胞活力。
　　結(jié)果：
　　1、顯微鏡下觀察WI-38細(xì)胞在不同濃度CSC干預(yù)下形態(tài)學(xué)變化：顯微鏡下觀察結(jié)果為：空白組的成纖維細(xì)胞胞體較大，細(xì)胞形態(tài)呈紡錘型或星型；而試驗(yàn)組細(xì)胞則表現(xiàn)為扁平狀纖維結(jié)構(gòu)。
　　2、不同濃度CSC對WI-38細(xì)胞在TGF-β1誘導(dǎo)下

5、向肌成纖維細(xì)胞分化的影響：通過ELISA法檢測，與對照組相比，2.5%CSC組和12.5%CSC組α-SMA含量無顯著增高，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）,中間濃度CSC組α-SMA含量顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且CSC濃度越高α-SMA含量越高，呈濃度依賴性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）3、不同濃度CSC對WI-38細(xì)胞增殖的影響：通過MTT比色法檢測，CSC對體外培養(yǎng)的WI-38細(xì)胞增殖的抑制作用較強(qiáng)，這種作用表現(xiàn)出一

6、定的劑量和時(shí)間依賴性。相同濃度香煙煙霧冷凝物不同時(shí)間（1-7d）作用后，隨作用時(shí)間延長其抑制率增大，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。相同時(shí)間不同濃度（0% CSC、5%CSC、7.5%CSC、10%CSC）作用后，隨濃度增高其抑制率增大，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、香煙煙霧冷凝物可抑制肺成纖維細(xì)胞的增殖；
　　2、濃度為7.5%的香煙煙霧冷凝物可能是促進(jìn)肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞的分化的最