塞來(lái)昔布對(duì)IL-1β誘導(dǎo)下人牙周膜成纖維細(xì)胞中COX-2、IL-8表達(dá)的影響.pdf

1、目的:(1)觀察不同濃度IL-1β誘導(dǎo)下人牙周膜成纖維細(xì)胞中COX-2的表達(dá)情況。(2)觀察塞來(lái)昔布對(duì)IL-1β誘導(dǎo)的人牙周膜成纖維細(xì)胞表達(dá)COX-2和IL-8的影響，為探討塞來(lái)昔布控制牙周組織炎癥的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:(1)體外原代培養(yǎng)人牙周膜成纖維細(xì)胞，并對(duì)其來(lái)源進(jìn)行鑒定。(2)選取5～8代人牙周膜成纖維細(xì)胞，隨機(jī)分為正常對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，正常對(duì)照組加入無(wú)血清培養(yǎng)液，實(shí)驗(yàn)組分別加入含0.1ng/ml、0.5ng

2、/ml、1ng/ml、5ng/ml、10ng/mlIL-1β的無(wú)血清培養(yǎng)液，采用免疫組織化學(xué)方法和ELISA法檢測(cè)HPLFs中COX-2的表達(dá)狀況，并探尋實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，引起最強(qiáng)炎癥的IL-1β濃度。(3)選取5～8代人牙周膜成纖維細(xì)胞，隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組為在含10ng/mlIL-1β的無(wú)血清培養(yǎng)基中分別加入0μM、10μM、25μM、50μM、100μM以二甲基亞砜(dimethyl sulfoxide，DMSO)助溶的塞

3、來(lái)昔布;對(duì)照組為含有同樣濃度DMSO的無(wú)血清培養(yǎng)基。采用ELISA法檢測(cè)塞來(lái)昔布對(duì)IL-1β誘導(dǎo)下人牙周膜成纖維細(xì)胞中COX-2和IL-8表達(dá)情況的影響。
　　 結(jié)果:(1)體外成功的培養(yǎng)人牙周膜成纖維細(xì)胞，倒置顯微鏡下:細(xì)胞為長(zhǎng)梭形或者星形，呈典型的成纖維樣細(xì)胞形態(tài);免疫組織化學(xué)染色:人牙周膜成纖維細(xì)胞抗角蛋白染色陰性，抗波形絲蛋白染色陽(yáng)性，表現(xiàn)出來(lái)源于中胚層的成纖維樣細(xì)胞特性。(2)不同濃度的IL-1β干預(yù)人牙周膜成纖維細(xì)胞

4、后COX-2表達(dá)的免疫組化結(jié)果顯示:正常對(duì)照組中COX-2呈陰性表達(dá)，經(jīng)lL-1β誘導(dǎo)后的人牙周膜成纖維細(xì)胞中COX-2在胞漿和核膜呈陽(yáng)性表達(dá);且COX-2表達(dá)強(qiáng)度隨IL-1β誘導(dǎo)濃度的升高呈現(xiàn)增強(qiáng)的趨勢(shì)(P＜0.05)。ELISA檢測(cè)結(jié)果同樣證實(shí)了COX-2的表達(dá)隨IL-1β誘導(dǎo)濃度的升高而增強(qiáng)(P＜0.05)。(3)塞來(lái)昔布對(duì)經(jīng)IL-1β誘導(dǎo)下HPLFs中COX-2表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)顯示:不同濃度的塞來(lái)昔布均可減少致炎后HPLFs中CO

5、X-2的表達(dá)，與未加藥組比較，P＜0.05;且隨著塞來(lái)昔布濃度的增加，HPLFs中COX-2表達(dá)呈現(xiàn)逐漸遞減的趨勢(shì)，實(shí)驗(yàn)各組間比較，P＜0.05。對(duì)IL-8表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)顯示:加有不同濃度塞來(lái)昔布的各實(shí)驗(yàn)組中，IL-8表達(dá)均有不同程度的減少，除10μM組外，其他加藥組與未加藥組比較，P＜0.05;當(dāng)塞來(lái)昔布的濃度在25μM內(nèi)時(shí)，IL-8的表達(dá)隨著塞來(lái)昔布濃度的升高而減少，在25μM時(shí)其表達(dá)最弱，與對(duì)照組比較，P＞0.05;當(dāng)塞來(lái)昔布的濃

6、度大于25μM時(shí)，IL-8的表達(dá)隨著塞來(lái)昔布濃度的增加有小幅度的增高，但組間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05。
　　 結(jié)論:(l)組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)牙周膜成纖維細(xì)胞步驟簡(jiǎn)單易掌握，可為探討牙周組織相關(guān)疾病提供實(shí)驗(yàn)條件。(2)11-1β誘導(dǎo)人牙周膜成纖維細(xì)胞后有COX-2表達(dá)，且COX-2的表達(dá)強(qiáng)度與IL-1β濃度呈正相關(guān)關(guān)系，說(shuō)明COX-2與牙周病的發(fā)生發(fā)展存在一定關(guān)系。(3)塞來(lái)昔布可有效減少經(jīng)IL-1β干預(yù)后的人牙周膜成纖