雙酚A和唾液酸對人精子功能的影響研究.pdf

1、環(huán)境中多種因子可以導(dǎo)致不孕不育等生殖健康問題，越來越多的研究表明，男性長期暴露在環(huán)境中有害物質(zhì)下會導(dǎo)致精液質(zhì)量下降，損害男性生育力。本文的研究目的是評估環(huán)境因子（雙酚A和唾液酸）對精子的影響，進(jìn)一步探索典型環(huán)境因子影響生殖的機(jī)理，以期為生殖疾病的臨床研究提供依據(jù)。
　　雙酚A（Bisphenol A, BPA）是一種塑料單體和可塑劑，工業(yè)上用來生產(chǎn)塑料和環(huán)氧樹脂，是全世界最大體積的化工品之一。BPA是一種典型的內(nèi)分泌干擾物（End

2、ocrine disrupting chemical,EDC），具有雌激素樣作用，而已有研究表明， BPA損害雄性哺乳動物的生育力。我們的前期工作發(fā)現(xiàn)，低濃度BPA（10-3 nM）的體外暴露顯著抑制小鼠精子運(yùn)動和頂體反應(yīng)。目前，關(guān)于BPA對雄性生育力的研究主要集中于動物模型，且BPA的使用濃度較高。反之，BPA對人精子直接作用的研究甚少。健康男性血液、尿液和精液中，BPA的濃度分別為~2.0 ng/ml（~8.8 nM）、~3.25

3、ng/ml（~14.3 nM）和~0.07 ng/mL（~0.31nM）。然而，這些生理可檢測濃度的BPA對人精子的影響尚不清楚。本文首次研究生理可檢測濃度的BPA對人精子的直接作用，以期探索不孕不育的新機(jī)制。實(shí)驗(yàn)?zāi)康模罕疚闹荚谔接懮砜蓹z測濃度的BPA（0，10-3，10-2，10-1，10，103 nM）的體外暴露對人精子功能的影響，并探索其可能的分子機(jī)制。實(shí)驗(yàn)方法：（1）伊紅-苯胺黑檢測人精子的存活率；（2）CASA檢測人精子運(yùn)動

4、參數(shù)；（3）精子穿透甲基纖維素評價人精子超活化運(yùn)動；（4）CTC染色評價人精子獲能；（5）酶標(biāo)儀檢測人精子胞內(nèi)鈣濃度變化；（6）western blotting定性分析人精子獲能相關(guān)的蛋白酪氨酸磷酸化變化。結(jié)果：低濃度BPA降低人精子存活率、總活力和前向運(yùn)動，抑制人精子超活化運(yùn)動和獲能，并降低人精子獲能相關(guān)的酪氨酸磷酸化水平，但不影響人精子胞內(nèi)鈣濃度。結(jié)論：BPA通過抑制人精子獲能相關(guān)的酪氨酸磷酸化而影響精子功能。由于生理可檢測濃度的B

5、PA可以抑制人精子功能，提示環(huán)境中BPA污染是造成男性生育障礙的一個重要因素。
　　唾液酸（Sialic acids, Sias）是一類酸性九碳單糖家族的總稱，其最普遍的兩種形式為N-乙酰神經(jīng)氨酸（N-acetylneuraminic acid, Neu5Ac）和N-羥乙酰神經(jīng)氨酸（N-glycolyneuraminic acid, Neu5Gc）。但是，人類缺失CMAH基因?qū)е聼o法表達(dá)Neu5Gc。唾液酸是精子和卵子透明帶表面主

6、要的糖類，也是糖蛋白和糖脂的主要組分，提示其在哺乳動物受精過程中具有重要作用。唾液酸能通過精子免疫保護(hù)、附睪精子成熟和精卵結(jié)合等方面調(diào)節(jié)精子功能，但是唾液酸對人精子的直接作用尚未見報道。唾液酸既是一種環(huán)境因子，也是人體中重要的生理因子，與人類健康密切相關(guān)。一方面，外源的唾液酸可以從食物中攝取，一部分被人體吸收并通過尿液排出體外，另一部分被納入新合成的內(nèi)源性糖蛋白，從而導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生抗體，影響生殖功能。另一方面，獲能過程中，精子表面結(jié)合唾液

7、酸可以被唾液酸酶水解為游離的唾液酸。然而，這些唾液酸僅僅是一種代謝產(chǎn)物，還是影響精子功能仍有待探索。之前有關(guān)唾液酸影響生殖的研究主要針對于動物模型，本文首次研究唾液酸對人精子的直接作用，可以更直觀的反映唾液酸對人精子功能的影響，表明唾液酸作為環(huán)境因子對影響人精子功能，間接反映唾液酸作為生理因子具有重要的生理作用。實(shí)驗(yàn)?zāi)康模罕疚闹荚谔接慛eu5Ac（0，0.1，1，10μM）和Neu5Gc（0，0.1，1，10μM）的體外暴露對人精子功能

8、的影響，并探索其可能的分子機(jī)制。實(shí)驗(yàn)方法：（1）CASA檢測人精子運(yùn)動參數(shù)；（2）精子穿透甲基纖維素評價人精子超活化運(yùn)動；（3）CTC染色評價人精子頂體反應(yīng)；（4）酶標(biāo)儀檢測人精子胞內(nèi)鈣濃度變化；（5）Western blotting定性分析人精子獲能相關(guān)的蛋白酪氨酸磷酸化水平。結(jié)果：內(nèi)源性的唾液酸（Neu5Ac）和外源型的唾液酸（Neu5Gc）對人精子的作用基本一致。Neu5Ac和Neu5Gc降低人精子總活力和前向運(yùn)動，抑制人精子超活