雙酚A和唾液酸對人精子功能的影響研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、環(huán)境中多種因子可以導致不孕不育等生殖健康問題,越來越多的研究表明,男性長期暴露在環(huán)境中有害物質(zhì)下會導致精液質(zhì)量下降,損害男性生育力。本文的研究目的是評估環(huán)境因子(雙酚A和唾液酸)對精子的影響,進一步探索典型環(huán)境因子影響生殖的機理,以期為生殖疾病的臨床研究提供依據(jù)。
  雙酚A(Bisphenol A, BPA)是一種塑料單體和可塑劑,工業(yè)上用來生產(chǎn)塑料和環(huán)氧樹脂,是全世界最大體積的化工品之一。BPA是一種典型的內(nèi)分泌干擾物(End

2、ocrine disrupting chemical,EDC),具有雌激素樣作用,而已有研究表明, BPA損害雄性哺乳動物的生育力。我們的前期工作發(fā)現(xiàn),低濃度BPA(10-3 nM)的體外暴露顯著抑制小鼠精子運動和頂體反應。目前,關于BPA對雄性生育力的研究主要集中于動物模型,且BPA的使用濃度較高。反之,BPA對人精子直接作用的研究甚少。健康男性血液、尿液和精液中,BPA的濃度分別為~2.0 ng/ml(~8.8 nM)、~3.25

3、ng/ml(~14.3 nM)和~0.07 ng/mL(~0.31nM)。然而,這些生理可檢測濃度的BPA對人精子的影響尚不清楚。本文首次研究生理可檢測濃度的BPA對人精子的直接作用,以期探索不孕不育的新機制。實驗目的:本文旨在探討生理可檢測濃度的BPA(0,10-3,10-2,10-1,10,103 nM)的體外暴露對人精子功能的影響,并探索其可能的分子機制。實驗方法:(1)伊紅-苯胺黑檢測人精子的存活率;(2)CASA檢測人精子運動

4、參數(shù);(3)精子穿透甲基纖維素評價人精子超活化運動;(4)CTC染色評價人精子獲能;(5)酶標儀檢測人精子胞內(nèi)鈣濃度變化;(6)western blotting定性分析人精子獲能相關的蛋白酪氨酸磷酸化變化。結果:低濃度BPA降低人精子存活率、總活力和前向運動,抑制人精子超活化運動和獲能,并降低人精子獲能相關的酪氨酸磷酸化水平,但不影響人精子胞內(nèi)鈣濃度。結論:BPA通過抑制人精子獲能相關的酪氨酸磷酸化而影響精子功能。由于生理可檢測濃度的B

5、PA可以抑制人精子功能,提示環(huán)境中BPA污染是造成男性生育障礙的一個重要因素。
  唾液酸(Sialic acids, Sias)是一類酸性九碳單糖家族的總稱,其最普遍的兩種形式為N-乙酰神經(jīng)氨酸(N-acetylneuraminic acid, Neu5Ac)和N-羥乙酰神經(jīng)氨酸(N-glycolyneuraminic acid, Neu5Gc)。但是,人類缺失CMAH基因導致無法表達Neu5Gc。唾液酸是精子和卵子透明帶表面主

6、要的糖類,也是糖蛋白和糖脂的主要組分,提示其在哺乳動物受精過程中具有重要作用。唾液酸能通過精子免疫保護、附睪精子成熟和精卵結合等方面調(diào)節(jié)精子功能,但是唾液酸對人精子的直接作用尚未見報道。唾液酸既是一種環(huán)境因子,也是人體中重要的生理因子,與人類健康密切相關。一方面,外源的唾液酸可以從食物中攝取,一部分被人體吸收并通過尿液排出體外,另一部分被納入新合成的內(nèi)源性糖蛋白,從而導致機體產(chǎn)生抗體,影響生殖功能。另一方面,獲能過程中,精子表面結合唾液

7、酸可以被唾液酸酶水解為游離的唾液酸。然而,這些唾液酸僅僅是一種代謝產(chǎn)物,還是影響精子功能仍有待探索。之前有關唾液酸影響生殖的研究主要針對于動物模型,本文首次研究唾液酸對人精子的直接作用,可以更直觀的反映唾液酸對人精子功能的影響,表明唾液酸作為環(huán)境因子對影響人精子功能,間接反映唾液酸作為生理因子具有重要的生理作用。實驗目的:本文旨在探討Neu5Ac(0,0.1,1,10μM)和Neu5Gc(0,0.1,1,10μM)的體外暴露對人精子功能

8、的影響,并探索其可能的分子機制。實驗方法:(1)CASA檢測人精子運動參數(shù);(2)精子穿透甲基纖維素評價人精子超活化運動;(3)CTC染色評價人精子頂體反應;(4)酶標儀檢測人精子胞內(nèi)鈣濃度變化;(5)Western blotting定性分析人精子獲能相關的蛋白酪氨酸磷酸化水平。結果:內(nèi)源性的唾液酸(Neu5Ac)和外源型的唾液酸(Neu5Gc)對人精子的作用基本一致。Neu5Ac和Neu5Gc降低人精子總活力和前向運動,抑制人精子超活

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