B7-H3對(duì)人精子功能影響的初步研究.pdf

1、目的:檢測(cè)精液中B7-H3的含量及其與精液參數(shù)之間的關(guān)系,及其對(duì)人類精子功能的影響。
　　方法:實(shí)驗(yàn)共分三部分
　　1.選擇83例正常有生育能力的健康男性(年齡22-37歲)和176例不育癥(male infertiliy)患者(21-38歲),用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測(cè)精液中B7-H3的含量,用計(jì)算機(jī)輔助精液分析(Computer-assiste

2、d semen analysis,CASA)檢測(cè)精液參數(shù),并分析它們的相關(guān)性。
　　2.用流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry,FCM)和熒光顯微鏡兩種方法檢測(cè)精子表面是否存在B7-H3受體及其分布情況。
　　3.在體外通過(guò)用不同濃度的B7-H3與精子共孵育0-4小時(shí)后,運(yùn)用CASA和異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)標(biāo)記的豌豆凝集素(Pisum sativum agglut

3、inin,PSA)熒光染色法檢測(cè)精子活力、精子獲能及精子頂體反應(yīng),觀察B7-H3對(duì)人類精子功能的影響。
　　結(jié)果:
　　1.健康人和不育癥患者血清B7-H3含量檢測(cè)結(jié)果分別為4.53±1.12ng/ml和4.49±1.92ng/ml,兩組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.962)。但是,健康人精漿B7-H3的含量(16.67±7.71ng/ml)明顯高于不育癥患者的B7-H3的含量(7.79±4.27ng/ml,P<0.0001

4、)。我們進(jìn)一步分析了所有標(biāo)本B7-H3的含量和精液參數(shù)之間的關(guān)系。精子前向運(yùn)動(dòng)正常的精液標(biāo)本的B7-H3的含量(11.53±6.36ng/ml)明顯高于那些精子前向運(yùn)動(dòng)降低的精液標(biāo)本(5.52±3.39ng/ml,P<0.0001)。此外B7-H3的含量還和精子的曲線速率(r=0.394,P=0.011),直線速率(r=0.542,P=0.002),平均路徑速率(r=0.498,P=0.003)成正相關(guān)關(guān)系。精子密度正常標(biāo)本的B7-H3

5、的含量(10.72±6.44ng/ml)明顯高于精子密度偏低的精液標(biāo)本的B7-H3的含量(6.18±4.03ng/ml,P=0.0007)。
　　2.為了探索精漿B7-H3是否存在調(diào)節(jié)精子功能的可能性,我們檢測(cè)人類精子表面是否存在B7-H3受體。結(jié)果我們?cè)诮】等撕筒挥Y患者精子表面均檢測(cè)到了B7-H3受體。并且在這幾類人的精子中B7-H3受體的表達(dá)率并無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.976)。而受體分布主要集中在精子頂體后區(qū),頸部,和中

6、部。
　　3.將精子和不同濃度的B7-H3(0,5,10,25ng/ml)在CO2培養(yǎng)箱中共孵育4小時(shí)。用CASA系統(tǒng)在不同時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)前向運(yùn)動(dòng)精子的百分率。孵育2小時(shí)后,與10ng/ml B7-H3孵育的弱精子癥患者精子活力的百分率由0小時(shí)時(shí)的精子活力(26.05±5.39％)增加到33.45±6.91％,增加有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.008)。與5ng/ml B7-H3孵育4小時(shí)后,健康人精子活力的百分率由70.35±11.71％增

7、加到70.71±11.41％(P=0.872),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同樣,與10ng/ml B7-H3孵育4小時(shí)的弱精子癥患者精子活力的百分率增加到45.76±8.72％(P=0.001)。與10ng/ml B7-H3孵育4小時(shí)的健康人的精子活力增加到75.46±8.77％,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.087)。用10ng/ml B7-H3孵育的弱精子癥患者的精子活力比5ng/ml B7-H3孵育的弱精子癥患者的精子活力明顯升高(P=0.0