厚樸酚的免疫抗炎作用及其對(duì)相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的調(diào)控.pdf

1、厚樸酚是一種聯(lián)苯酚類化合物，是中國(guó)傳統(tǒng)中藥厚樸的主要活性成分，既往研究表明厚樸酚具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗腫瘤、抗哮喘、抗氧化、保護(hù)心腦血管、抗?jié)儭㈡?zhèn)痛、激素調(diào)節(jié)等多種藥理學(xué)作用。目前，對(duì)厚樸酚免疫活性和抗炎活性的研究取得一定成果，但其作用機(jī)制仍待進(jìn)一步拓展研究。
　　目的：
　　本實(shí)驗(yàn)旨在對(duì)厚樸酚對(duì)人相關(guān)免疫細(xì)胞活性及功能的影響進(jìn)行初步研究，在建立人源U937巨噬細(xì)胞炎癥模型的基礎(chǔ)上，研究厚樸酚的抗炎活性，并對(duì)其作用機(jī)制

2、進(jìn)行初步探討。以期豐富厚樸酚免疫抗炎活性基礎(chǔ)研究實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，為其作為相關(guān)抗炎藥物的研發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和參考。
　　方法：
　　我們通過(guò)MTT法檢測(cè)厚樸酚對(duì)U937巨噬細(xì)胞及人LO-2正常肝細(xì)胞的毒性，確定厚樸酚無(wú)毒濃度范圍；流式細(xì)胞術(shù)和激光共聚焦檢測(cè)厚樸酚對(duì)U937巨噬細(xì)胞巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響；CCK-8法檢測(cè)厚樸酚對(duì)人外周血淋巴細(xì)胞（PBMC）、T細(xì)胞增殖活性的影響；通過(guò)脂多糖（LPS）誘導(dǎo)成熟分化的U937巨噬細(xì)胞來(lái)構(gòu)建細(xì)

3、胞炎癥模型；Griess試劑檢測(cè)厚樸酚對(duì)LPS誘導(dǎo) U937巨噬細(xì)胞生成NO的影響；Real-time PCR檢測(cè)厚樸酚對(duì)LPS誘導(dǎo)U937巨噬細(xì)胞表達(dá)炎性因子的影響；ELISA法檢測(cè)厚樸酚對(duì)LPS誘導(dǎo)U937巨噬細(xì)胞分泌炎性因子的影響；Western blotting和激光共聚焦檢測(cè)厚樸酚對(duì)LPS誘導(dǎo)U937巨噬細(xì)胞相關(guān)信號(hào)通路的影響。
　　結(jié)果：
　　厚樸酚濃度≤40μM時(shí)，對(duì)U937巨噬細(xì)胞無(wú)毒；其濃度在10-40μM

4、時(shí)呈濃度依賴性增強(qiáng)細(xì)胞吞噬功能，40μM時(shí)對(duì)細(xì)胞吞噬功能增強(qiáng)近50％；1-20μM濃度范圍，厚樸酚對(duì)PBMC的存活有明顯抑制作用；1μM時(shí)對(duì)T細(xì)胞的增殖有明顯抑制作用，而10、20μM則起促進(jìn)作用。在1-40μM濃度范圍，能顯著抑制LPS誘導(dǎo)引起的NO產(chǎn)生；能濃度依賴性抑制IL-1β、TNF-α的mRNA表達(dá)，40μM高濃度時(shí)效果最顯著；能濃度依賴性抑制IL-1β蛋白的分泌，當(dāng)濃度為10、20μM時(shí)，對(duì)TNF-α蛋白的分泌無(wú)明顯影響，而

5、在40μM時(shí)則有顯著抑制作用；其對(duì)MAPK信號(hào)通路中的ERK1/2部分并無(wú)明顯影響，能下調(diào)JNK、p38的磷酸化水平；其能抑制NF-κB信號(hào)通路中IκBα的磷酸，濃度依賴性下調(diào)p65的磷酸化水平。
　　結(jié)論：
　　厚樸酚在體外能增強(qiáng)U937巨噬細(xì)胞的吞噬功能；抑制PBMC的存活；低濃度能抑制T細(xì)胞增殖，高濃度則起促進(jìn)作用。有明顯的抗炎活性，可能是通過(guò)下調(diào)MAPK信號(hào)通路JNK、p38的磷酸化水平，下調(diào)NF-κB信號(hào)通路中Iκ