厚樸酚的免疫抗炎作用及其對相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的調(diào)控.pdf

1、厚樸酚是一種聯(lián)苯酚類化合物，是中國傳統(tǒng)中藥厚樸的主要活性成分，既往研究表明厚樸酚具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗腫瘤、抗哮喘、抗氧化、保護心腦血管、抗?jié)?、?zhèn)痛、激素調(diào)節(jié)等多種藥理學(xué)作用。目前，對厚樸酚免疫活性和抗炎活性的研究取得一定成果，但其作用機制仍待進一步拓展研究。
　　目的：
　　本實驗旨在對厚樸酚對人相關(guān)免疫細胞活性及功能的影響進行初步研究，在建立人源U937巨噬細胞炎癥模型的基礎(chǔ)上，研究厚樸酚的抗炎活性，并對其作用機制

2、進行初步探討。以期豐富厚樸酚免疫抗炎活性基礎(chǔ)研究實驗數(shù)據(jù)，為其作為相關(guān)抗炎藥物的研發(fā)提供實驗依據(jù)和參考。
　　方法：
　　我們通過MTT法檢測厚樸酚對U937巨噬細胞及人LO-2正常肝細胞的毒性，確定厚樸酚無毒濃度范圍；流式細胞術(shù)和激光共聚焦檢測厚樸酚對U937巨噬細胞巨噬細胞吞噬功能的影響；CCK-8法檢測厚樸酚對人外周血淋巴細胞（PBMC）、T細胞增殖活性的影響；通過脂多糖（LPS）誘導(dǎo)成熟分化的U937巨噬細胞來構(gòu)建細

3、胞炎癥模型；Griess試劑檢測厚樸酚對LPS誘導(dǎo) U937巨噬細胞生成NO的影響；Real-time PCR檢測厚樸酚對LPS誘導(dǎo)U937巨噬細胞表達炎性因子的影響；ELISA法檢測厚樸酚對LPS誘導(dǎo)U937巨噬細胞分泌炎性因子的影響；Western blotting和激光共聚焦檢測厚樸酚對LPS誘導(dǎo)U937巨噬細胞相關(guān)信號通路的影響。
　　結(jié)果：
　　厚樸酚濃度≤40μM時，對U937巨噬細胞無毒；其濃度在10-40μM

4、時呈濃度依賴性增強細胞吞噬功能，40μM時對細胞吞噬功能增強近50％；1-20μM濃度范圍，厚樸酚對PBMC的存活有明顯抑制作用；1μM時對T細胞的增殖有明顯抑制作用，而10、20μM則起促進作用。在1-40μM濃度范圍，能顯著抑制LPS誘導(dǎo)引起的NO產(chǎn)生；能濃度依賴性抑制IL-1β、TNF-α的mRNA表達，40μM高濃度時效果最顯著；能濃度依賴性抑制IL-1β蛋白的分泌，當(dāng)濃度為10、20μM時，對TNF-α蛋白的分泌無明顯影響，而

5、在40μM時則有顯著抑制作用；其對MAPK信號通路中的ERK1/2部分并無明顯影響，能下調(diào)JNK、p38的磷酸化水平；其能抑制NF-κB信號通路中IκBα的磷酸，濃度依賴性下調(diào)p65的磷酸化水平。
　　結(jié)論：
　　厚樸酚在體外能增強U937巨噬細胞的吞噬功能；抑制PBMC的存活；低濃度能抑制T細胞增殖，高濃度則起促進作用。有明顯的抗炎活性，可能是通過下調(diào)MAPK信號通路JNK、p38的磷酸化水平，下調(diào)NF-κB信號通路中Iκ