調(diào)控成骨細胞分化的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路研究.pdf

1、成骨細胞在分化過程中受到多種來自胞外的信號及其相關(guān)通路的調(diào)控.該研究應(yīng)用來源于胎鼠顱骨的成骨前體細胞系MC3T3-E1探討MAPK在成骨細胞分化過程中的調(diào)控作用.首先,應(yīng)用50 μg/ml抗壞血酸和10 mM β-磷酸甘油聯(lián)合作用的化學誘導(dǎo)劑在體外建立穩(wěn)定和可重復(fù)的成骨細胞分化誘導(dǎo)和鑒定體系.然后,應(yīng)用Western-blot實驗檢測MAPK信號通路相關(guān)蛋白在成骨細胞分化中的活化情況.在具體研究MAPK信號通路對成骨細胞分化調(diào)控的實驗中

2、,主要采取阻斷和增強活化的兩種研究方法.一方面,應(yīng)用相關(guān)信號通路的特異性抑制劑阻斷這些信號通路的作用,觀察成骨細胞分化的變化.另一方面,應(yīng)用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染體系將MEK1野生型和MEK1活化型基因?qū)氤晒羌毎?通過篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞系,然后應(yīng)用這些細胞系研究相關(guān)信號通路對成骨細胞分化的調(diào)控作用.最后,應(yīng)用成骨分化相關(guān)細胞因子BMP-2刺激穩(wěn)定轉(zhuǎn)染MEK1野生型和MEK1活化型基因的MC3T3-E1細胞,研究BMP-2的成骨誘導(dǎo)作用通路與M

3、APK通路相互關(guān)系.同時,還初步觀察了PI 3K信號通路對成骨細胞分化的調(diào)控作用.實驗結(jié)果表明:(1)體外建立了穩(wěn)定、可靠和可重復(fù)的成骨細胞分化誘導(dǎo)體系,即聯(lián)合應(yīng)用50 μ g/ml抗壞血酸和10 mM β-磷酸甘油連續(xù)誘導(dǎo)成骨細胞兩周以上,成骨細胞分化的檢測主要通過ALP和von Kossa染色進行.(2)MAPK信號通路中p38旁路是成骨細胞分化所必須的,而MEK/ERK旁路在成骨細胞分化過程中發(fā)揮抑制效應(yīng);(3)PI3K是成骨細胞