丹皮酚與代謝產(chǎn)物的抗炎抗氧化活性及其對MAPK炎性信號通路的調(diào)控機制.pdf

1、本課題的目的是研究丹皮酚的體內(nèi)抗炎活性，進一步研究丹皮酚及其主要代謝產(chǎn)物的抗炎活性及分子作用機制。
　　通過角叉菜膠致大鼠足跖腫脹急性炎癥模型和 DSS誘導小鼠潰瘍性結腸炎模型來評價丹皮酚對炎癥類疾病的保護作用和治療作用。丹皮酚（M1）及其10個體內(nèi)主要代謝產(chǎn)物（M2~M11）的抗炎及抗氧化活性采用體外抗炎抗氧化實驗檢測。用LPS刺激小鼠單核巨噬細胞RAW264.7釋放TNF-α、NO等炎癥介質(zhì)，并進一步誘導炎癥反應，以此實驗模型

2、評價丹皮酚及其主要代謝產(chǎn)物的體外抗炎作用及機制。實驗采用Griess法檢測NO水平、ELISA法檢測TNF-α水平，同時采用MTT法評價細胞毒性。Western blot法檢測iNOS蛋白、COX-2蛋白、IκB-α蛋白、p-ERK蛋白、p-JNK蛋白、p-p38蛋白及內(nèi)參蛋白β-actin水平，探討其在NF-κB或MAPKs炎癥信號通路上的作用機制。
　　口服給藥后，丹皮酚（20 mg/kg和40 mg/kg）能夠減少爪體積的腫

3、脹，并且減緩小鼠潰瘍性結腸炎的發(fā)展。與丹皮酚相比較，代謝產(chǎn)物 M3和 M11表現(xiàn)出更為顯著的DPPH自由基清除能力；除了代謝產(chǎn)物M8，其余代謝產(chǎn)物均具有羥基自由基清除活性，但是代謝產(chǎn)物M3和M11是最為有效的成分。代謝產(chǎn)物M3和M11可以有效地抑制LPS誘導RAW264.7細胞產(chǎn)生炎癥介質(zhì) NO。Western blot結果表明，丹皮酚及其代謝產(chǎn)物M3和M11能夠下調(diào)iNOS和COX-2蛋白的高表達，并且相比于原型藥物丹皮酚，代謝產(chǎn)物

4、M3和 M11的作用更為顯著。進一步研究表明，丹皮酚及其代謝產(chǎn)物M3和M11能夠阻斷MAPK/ERK1/2和p38蛋白的磷酸化，而對JNK蛋白的磷酸化沒有影響。
　　綜上，丹皮酚預處理可能作為一種針對包括結腸炎在內(nèi)的炎癥性疾病的有效治療方法；丹皮酚通過體內(nèi)代謝為其活性代謝產(chǎn)物發(fā)揮抗炎和抗氧化作用；丹皮酚可能是通過轉(zhuǎn)變?yōu)榇x產(chǎn)物2,5-二羥基-4-甲氧基苯乙酮和2,4,5-三羥基苯乙酮阻斷MAPK/ERK和MAPK/p38信號轉(zhuǎn)導通