BMP-2在體外對(duì)骨質(zhì)疏松患者的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化的影響.pdf

1、目的：
　　體外貼壁培養(yǎng)獲得純度較高的骨質(zhì)疏松患者骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（OPBMSCs），為進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)打好可靠基礎(chǔ)，探討不同濃度骨形態(tài)發(fā)生蛋白2( BMP2)在體外對(duì)骨質(zhì)疏松患者骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（OPBMSCs）成脂分化中的影響，并為臨床指導(dǎo)骨質(zhì)疏松治療方案提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　抽取骨質(zhì)疏松患者的骨髓，在體外用貼壁培養(yǎng)法獲得原代OP BMSCs，流式細(xì)胞儀檢測(cè)P2細(xì)胞表面抗原標(biāo)志物；取第二、三代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)：1個(gè)

2、對(duì)照組+5個(gè)實(shí)驗(yàn)組：實(shí)驗(yàn)組分兩個(gè)階段進(jìn)行操作：第一階段用成脂誘導(dǎo)液誘導(dǎo)3天，第二階段在成脂誘導(dǎo)液中添加不同濃度的BMP-2（ng/ml）0.5、5、50、100、500分別繼續(xù)誘導(dǎo)14天；而對(duì)照組始終用常規(guī) BMSCs培養(yǎng)基培養(yǎng)。各組經(jīng)誘導(dǎo)后第17天油紅O染色，觀察細(xì)胞脂滴染色情況及檢測(cè)細(xì)胞成脂OD值。同時(shí)WB檢測(cè)PPAR-γ、C/EBPa蛋白質(zhì)表達(dá)情況以及Q-PCR檢測(cè)PPAR-γ、C/EBPa基因表達(dá)水平。
　　結(jié)果：

3、　　貼壁培養(yǎng)法分離、傳代獲得第二代干細(xì)胞，流式結(jié)果P2表達(dá)CD44、HLA-ABC、CD105均>92％，而陰性抗原CD34、CD45表達(dá)均<7%，可以說明OPBMSCs純度高。各實(shí)驗(yàn)組經(jīng)誘導(dǎo)17天后，油紅O染色圖片觀察示：BMP-2濃度（ng/ml）在0.5到50的濃度下脂滴數(shù)呈現(xiàn)增多趨勢(shì)；而在50到500的濃度下脂滴數(shù)呈下降趨勢(shì)，濃度500與0這兩組脂滴數(shù)量相近。脂肪定量OD值統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：對(duì)照組與任何實(shí)驗(yàn)組脂肪含量對(duì)比，P<0.05

4、，可以認(rèn)為對(duì)照組的脂肪含量比任何實(shí)驗(yàn)組都要低；實(shí)驗(yàn)組BMP2濃度（ng/ml）在5與50對(duì)比，P<0.05，說明在此區(qū)間脂肪含量呈上升趨勢(shì)，具有BMP2濃度依賴性；而BMP-2濃度100與500對(duì)比，P<0.05，說明在此區(qū)間脂肪含量呈下降趨勢(shì)。成脂肪相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子PPARγ、C/EBP及蛋白表達(dá)水平也證明呈現(xiàn)與脂肪定量OD值相類似趨勢(shì)。
　　結(jié)論：
　　貼壁培養(yǎng)可以獲得高純度OPBMSCs，為實(shí)驗(yàn)提供可靠基礎(chǔ)。低濃度BMP2