bFGF和BMP-2預(yù)處理對骨髓間充質(zhì)干細胞干性維持與成骨分化潛能的差異影響.pdf

1、目的：
　　牙周再生一直是牙周領(lǐng)域的研究熱點。骨髓間充質(zhì)干細胞(bone morrow mesenchymal stem cells，BMMSCs)是骨髓來源的多能干細胞，在組織工程領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。堿性成纖維細胞生長因子(fibroblast growth factor,bFGF)和骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2(bone morphogenetic protein2,BMP-2)在骨再生及牙周組織再生領(lǐng)域的應(yīng)用已得到廣泛研究。然而BMMSCs

2、會隨著增殖傳代逐漸失去干細胞特性。因此如何獲得具有良好增殖能力和成骨分化潛能的干細胞是目前牙周組織工程領(lǐng)域研究的熱點。本研究旨在探究通過bFGF和BMP-2分別預(yù)處理細胞的方法對BMMSCs增殖、成骨分化、干性維持方面的差異影響并探討其機制。
　　方法：
　　1、分離培養(yǎng)Wistar大鼠的BMMSCs，流式細胞術(shù)檢測BMMSCs表面CD34,CD44,CD45,CD90的表達情況。將培養(yǎng)至P3代的BMMSCs分為三組，分別用

3、普通培養(yǎng)基、含20ng/ml bFGF的培養(yǎng)基和含100ng/ml BMP-2培養(yǎng)基培養(yǎng)3天，收集細胞（以下簡稱為對照組、bFGF預(yù)處理組及BMP-2預(yù)處理組）。然后在無bFGF或BMP-2作用的條件下繼續(xù)培養(yǎng)細胞。
　　2、三組BMMSCs預(yù)處理后培養(yǎng)1,2,3,5天，采用CCK-8法檢測三組BMMSCs的增殖活性。并采用流式細胞術(shù)檢測細胞周期分布的變化。
　　3、三組BMMSCs經(jīng)成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)3,7,14天后采用ALP活

4、性試劑盒檢測細胞的ALP活性。成骨誘導(dǎo)液培養(yǎng)28天后，進行茜素紅染色觀察鈣結(jié)節(jié)，同時進行定量檢測。
　　4、采用流式細胞術(shù)檢測三組BMMSCs表面CD90的表達情況。
　　結(jié)果：
　　1、流式細胞術(shù)結(jié)果顯示BMMSCs表面CD90、CD44高表達，造血系干細胞表面標志抗原CD34、CD45低表達。
　　2、CCK8細胞增殖檢測實驗結(jié)果顯示:bFGF和BMP-2預(yù)處理組細胞增殖活性顯著高于對照組(p＜0.05)，并

5、且bFGF預(yù)處理組BMMSCs的增殖活性較BMP-2預(yù)處理組增強(p＜0.05)。細胞周期檢測結(jié)果顯示:經(jīng)bFGF預(yù)處理后處于分裂期（S期）的細胞數(shù)增多，而處于靜止期（G0/G1期）的細胞數(shù)減少(p＜0.05)，而BMP-2預(yù)處理后BMMSCs的細胞周期分布（G0/G1期，S期，G2/M期）沒有顯著改變。
　　3、ALP活性檢測結(jié)果顯示:第3天時，BMP-2預(yù)處理組BMMSCs ALP活性高于對照組和bFGF預(yù)處理組(p＜0.05

6、)，第7天時，bFGF預(yù)處理組與BMP-2預(yù)處理組BMMSCs ALP活性達到最高峰且兩組ALP活性差異無統(tǒng)計學意義(p＞0.05)，并顯著高于對照組(p＜0.05)，而第14天時，bFGF預(yù)處理組細胞ALP活性顯著高于對照組和BMP-2預(yù)處理組(p＜0.05)。成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)28天后，鈣結(jié)節(jié)茜素紅染色及定量檢測結(jié)果顯示:三組細胞的鈣結(jié)節(jié)形成情況沒有明顯差異(p＞0.05)。
　　4、bFGF預(yù)處理組CD90陽性細胞百分比高于對照組