甲狀旁腺激素對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的影響.pdf

1、目的：
　　1.通過(guò)對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）的分離培養(yǎng)與鑒定，為實(shí)驗(yàn)提供了合格的細(xì)胞來(lái)源。
　　2.探討不同濃度甲狀旁腺激素1-34（PTH1-34）對(duì)大鼠BMSCs成骨分化的影響及其可能的作用機(jī)制，進(jìn)而為甲狀旁腺激素治療骨質(zhì)疏松癥提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)與依據(jù)。
　　方法：
　　1.通過(guò)貼壁培養(yǎng)的方法分離培養(yǎng)骨髓間充干細(xì)胞并且對(duì)其進(jìn)行鑒定。<

2、br>　　2.不同濃度PTH1-34（0、10-10、10-9、10-8mol/L）間斷作用于BMSCs，以48個(gè)小時(shí)作為一個(gè)周期，前6個(gè)小時(shí)加藥，后42個(gè)小時(shí)不加藥，采用MTT法對(duì)BMSCs的增殖情況進(jìn)行檢測(cè)。
　　3.不同濃度PTH1-34（0、10-10、10-9、10-8mol/L）間斷作用于BMSCs，以48個(gè)小時(shí)作為一個(gè)周期，前6個(gè)小時(shí)加藥，后42個(gè)小時(shí)不加藥，采用PNPP法檢測(cè)堿性磷酸酶（ALP）活性、放射免疫法檢測(cè)

3、骨鈣素(BGP)含量和實(shí)時(shí)定量RT-PCR法檢測(cè)Runx2 mRNA的表達(dá)量。
　　4.采用數(shù)據(jù)軟件包SPSS22.0對(duì)所有的數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ X?S）方式表示，組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)， P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.在顯微鏡下觀察，原代BMSCs培養(yǎng)3天后貼壁并呈現(xiàn)梭形，5天后排列呈集落狀，10-14天左右鋪滿瓶壁；第三代BMSCs的生長(zhǎng)曲線

4、結(jié)果顯示，前1-2天為潛伏期，3-5天為對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，之后為平臺(tái)期；細(xì)胞周期測(cè)定大部分處在G1/G0期；流式細(xì)胞分析儀測(cè)定BMSCs表面抗原標(biāo)志物CD29、CD44陽(yáng)性表達(dá)，CD45陰性表達(dá)；將BMSCs誘導(dǎo)分化成為成骨細(xì)胞后進(jìn)行茜素紅染色，可以觀察到鈣結(jié)節(jié)，將BMSCs誘導(dǎo)分化成為脂肪細(xì)胞后進(jìn)行油紅O染色，可以觀察到脂滴。
　　2.將不同濃度PTH1-34（0、10-10、10-9、10-8mol/L）間斷作用于BMSCs，其增殖

5、水平無(wú)明顯變化，各組之間的比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　3.將不同濃度PTH1-34（10-10、10-9、10-8mol/L）間斷作用于BMSCs，其ALP活性、BGP含量及Runx2 mRNA表達(dá)量較對(duì)照組均增加，其中以10-8mol/L PTH1-34組最高，且呈現(xiàn)濃度依賴關(guān)系，對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組組間比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.BMSCs在體外能被成功分離、純