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文檔簡介
1、目的:
1.大鼠骨髓間充質干細胞的分離、培養(yǎng),觀察其形態(tài)特征及鑒定表面標志物。
2.對大鼠骨髓間充質干細胞成脂分化和成骨分化進行研究。
3.觀察不同濃度PTH1-34對大鼠骨髓間充質干細胞成脂分化的影響,探討其可能機制。
方法:
1.采用貼壁法分離培養(yǎng)大鼠骨髓間充質干細胞(BMSCs),觀察其形態(tài)、細胞生長曲線,流式細胞儀檢測表面標志物及細胞周期。
2.誘導BMSCs定向分化為
2、脂肪細胞和成骨細胞,并通過組織染色法鑒定分化后的細胞。
3.以第三代BMSCs為體外試驗模型,不同濃度甲狀旁腺激素(PTH1-34)(0、10-10、10-9、10-8mol/L)分別作用于加入成脂誘導液的BMSCs,14天后采用ELISA法測定LPL活性,采用RT-PCR法測定ALP和PPARγ-2 mRNA表達水平,觀察不同濃度PTH1-34對BMSCs成脂分化的影響。
4.統(tǒng)計學方法采用統(tǒng)計學軟件SPSS13.
3、0軟件進行分析,計量資料的表示用X?S,采用方差分析和LSD-t檢驗進行各組間比較,P<0.05差異具有統(tǒng)計學意義。
結果:
1.BMSCs貼壁生長,均一長梭形,生長曲線為“S”型。細胞周期測定大部分處于G1/G0期。P3代BMSCs陽性表達CD44、CD29,陰性表達CD45。
2.成脂誘導液誘導BMSCs分化21天后,油紅O染色可見胞內脂滴出現,成骨誘導28天后,茜素紅染色可見鈣結節(jié)。
3.不
4、同濃度PTH1-34(10-10、10-9、10-8、mol/L)分別作用于BMSCs后,與未加入PTH1-34的對照組比較,LPL、PPARγ-2的表達量下降,ALP活性明顯增加,并呈劑量依賴性,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
結論:
1.BMSCs形態(tài)為均一長梭形;穩(wěn)定表達CD44、CD29,不表達CD45;BMSCs具有向脂肪細胞和成骨細胞分化的潛能。
2.PTH1-34抑制BMSCs成脂分化,促
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