PARP-1-AIF通路介導(dǎo)戊二酸尿癥Ⅰ型大鼠大腦皮質(zhì)損傷的機(jī)制研究.pdf

1、背景及目的：
　　戊二酸尿癥Ⅰ型是戊二酰輔酶A脫氫酶缺陷引起的常染色體隱性遺傳性疾病。致病基因定位于19p13.2。該病的生化特征是戊二酸、三羥戊二酸和戊烯二酸等有害代謝產(chǎn)物累積體液和組織中。臨床表現(xiàn)主要為大頭畸形、進(jìn)行性肌張力異常和運(yùn)動(dòng)障礙?；純撼Ｔ谏?-36月非特異性疾?。ㄈ绺腥尽⒚庖呓臃N、手術(shù)等所致高代謝狀態(tài)下）引發(fā)急性腦病危象，導(dǎo)致急性紋狀體和皮質(zhì)損害，重者可危及生命。在影像學(xué)上，GAⅠ患者表現(xiàn)出特異性的年齡-腦區(qū)依賴性

2、的神經(jīng)病理?yè)p害特征，包括額顳葉皮質(zhì)萎縮、紋狀體退行性變、腦白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良、大腦外側(cè)裂增寬等。近年來(lái)的研究熱點(diǎn)多集中在興奮性神經(jīng)毒性、氧化應(yīng)激和能量障礙等，但具體的發(fā)病機(jī)制尚未明確。
　　Parthanatos是近幾年發(fā)現(xiàn)的一種新的PARP-1依賴的細(xì)胞死亡通路，以PARP-1激活為基礎(chǔ)，消耗NAD+，從而生成PAR，促使AIF從線粒體轉(zhuǎn)位到細(xì)胞核，引起染色質(zhì)凝集和DNA大片段化，誘導(dǎo)細(xì)胞死亡。PARP具有聚合核苷酸和進(jìn)行蛋白修飾的作

3、用，而PARP-1在PARP家族中含量最高，起主要的DNA修復(fù)功能。輕微的DNA損傷可適度激活PARP，修復(fù)DNA，使細(xì)胞存活。而大面積DNA斷裂使PARP過(guò)度激活，推進(jìn)細(xì)胞死亡進(jìn)程。研究發(fā)現(xiàn)抑制PARP-1具有神經(jīng)保護(hù)作用，有望成為治療該類疾病的新靶點(diǎn)。PJ34是一種競(jìng)爭(zhēng)性、選擇性PARP-1/2抑制劑，在帕金森病、缺血再灌注損傷、糖尿病等疾病中起保護(hù)作用。
　　本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)新生乳鼠慢性皮下注射戊二酸，制作戊二酸血癥I型模型，并

4、腹腔注射PARP-1抑制劑，組織學(xué)觀察各組實(shí)驗(yàn)鼠額葉和顳葉神經(jīng)細(xì)胞的病理形態(tài)改變，檢測(cè)額葉和顳葉中PARP-1和AIF蛋白表達(dá)水平，進(jìn)而從動(dòng)物水平探討Parthanatos通路在戊二酸致大鼠腦損傷中的分子機(jī)制，以及PARP-1抑制劑對(duì)皮質(zhì)神經(jīng)元的保護(hù)作用，篩選臨床干預(yù)靶點(diǎn)，為治療提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1、新生 SD雄性大鼠隨機(jī)分為5組：正常對(duì)照組（NS）、低劑量戊二酸組（LGA）、高劑量戊二酸組（HGA）、低劑量+

5、保護(hù)劑組（LGA+PJ34）和高劑量+保護(hù)劑組（HGA+PJ34）。
　　2、生后第4 d開(kāi)始給藥，LGA組和HGA組分別以5μmol/g和10μmol/g的計(jì)量頸背部皮下注射戊二酸，NS組以5μmol/g頸背部皮下注射生理鹽水。保護(hù)劑（PJ34）于每天第一次給藥前30min以10mg/kg的計(jì)量腹腔注射。給藥時(shí)間：7:30，15:00，22:30。連續(xù)給藥20 d（生后第23 d），最后一次給藥12h后開(kāi)始取材。
　　3、

6、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析各組實(shí)驗(yàn)鼠每日體重增長(zhǎng)，HE染色觀察其額葉和顳葉神經(jīng)細(xì)胞病理變化，Western blot檢測(cè)額顳葉中PARP-1和AIF蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1、HGA組存活率明顯低于其他各組。給藥期間，LGA組和NS組的體重增加無(wú)顯著差異；給藥1～20天，HGA組體重增加明顯低于NS組和LGA組，在給藥前7d，體重增加最慢，隨著給藥時(shí)間延長(zhǎng)，體重增加趨勢(shì)有所上升；PJ34可明顯改善高劑量GA引起的乳鼠體重增加遲緩，而

7、LGA+ PJ34組和LGA組體重增加無(wú)顯著性差異。給藥時(shí)間越長(zhǎng)，各實(shí)驗(yàn)組體重增加差異逐漸縮短。
　　2、組織病理學(xué)發(fā)現(xiàn)GA導(dǎo)致額葉和顳葉細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化，排列紊亂，細(xì)胞空泡樣變，染色質(zhì)凝集。HGA較LGA變化更加明顯。保護(hù)劑PJ34可以改善GA導(dǎo)致的神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，細(xì)胞形態(tài)改善，排列較為規(guī)律，空泡樣變減少。
　　3、皮下注射GA能引起額葉和顳葉組織PARP-1、AIF表達(dá)均高于生理鹽水組，并且HGA組的表達(dá)水平高于LG