大鼠肝臟及小鼠大腦皮質(zhì)質(zhì)膜蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、細(xì)胞質(zhì)膜介導(dǎo)細(xì)胞與外界環(huán)境以及細(xì)胞與細(xì)胞之間的物質(zhì)交換、能量轉(zhuǎn)換和信號傳遞。細(xì)胞質(zhì)膜微區(qū)是細(xì)胞質(zhì)膜中富含鞘脂和膽固醇的膜微疇結(jié)構(gòu)，參與細(xì)胞內(nèi)外物質(zhì)交流、細(xì)胞信號傳導(dǎo)等重要的細(xì)胞生命活動。質(zhì)膜蛋白質(zhì)在藥物研究中有重大意義。 本論文研究分為兩個部分，第一部分為大鼠肝臟低豐度整合質(zhì)膜蛋白質(zhì)組學(xué)研究。肝臟是人體中最重要的器官之一，在代謝中扮演著重要的角色，因此肝臟質(zhì)膜蛋白質(zhì)組的研究具有重要意義。低豐度、強(qiáng)疏水性膜蛋白質(zhì)的鑒定仍然是質(zhì)膜蛋

2、白質(zhì)組研究的主要挑戰(zhàn)，這部分工作采用兩次密度梯度離心法純化大鼠肝臟質(zhì)膜，電鏡和免疫印跡顯示，與一次超離相比，質(zhì)膜富集了6倍。收集質(zhì)膜采用Na<,2>CO<,3>處理，氯仿與甲醇抽提，以及Triton X-100處理后進(jìn)行超離以分離出微區(qū)的三個組分。共鑒定了457個非冗余蛋白質(zhì)，46％來自微區(qū)提取策略，23％具有一個或一個以上的跨膜區(qū)(TM)，53個蛋白質(zhì)與細(xì)胞通信有關(guān)。研究結(jié)果表明：Na<,2>CO<,3>處理膜有利于堿性蛋白質(zhì)研究，氯

3、仿與甲醇的使用有利于多跨膜區(qū)蛋白質(zhì)研究，微區(qū)提取策略有利于低豐度蛋白質(zhì)研究。 第二部分為衰老過程中小鼠大腦皮質(zhì)質(zhì)膜微區(qū)的比較蛋白質(zhì)組學(xué)初步分析。大腦皮質(zhì)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最復(fù)雜的部位，是人類的最高神經(jīng)中樞。大腦皮質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行著頻繁的信號傳導(dǎo)和物質(zhì)交換過程，其細(xì)胞質(zhì)膜微區(qū)在這些活動中起到了重要作用。衰老是生命的基本過程，腦功能退化是衰老的重要方面，因此，衰老過程中大腦皮質(zhì)質(zhì)膜微區(qū)的比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究具有重要意義。本部分工作對D-半乳糖亞

4、急性衰老模型小鼠和正常小鼠的大腦皮質(zhì)質(zhì)膜微區(qū)蛋白質(zhì)進(jìn)行了比較蛋白質(zhì)組學(xué)初步分析。采用去垢劑處理和蔗糖密度梯度離心方法得到純化的質(zhì)膜微區(qū)蛋白質(zhì)，經(jīng)免疫印跡檢驗顯示微區(qū)蛋白得到了富集且降低了其他細(xì)胞器的污染。采用雙向電泳和軟件分析得到了造模組和對照組微區(qū)蛋白質(zhì)組的78個差異蛋白質(zhì)點(diǎn)，經(jīng)質(zhì)譜鑒定了36個蛋白質(zhì)，其中19個蛋白質(zhì)在造模組中是上調(diào)的，17個是下調(diào)的。在上調(diào)的差異蛋白質(zhì)中，多為糖代謝和生物氧化作用過程中起重要作用的酶及應(yīng)激蛋白質(zhì)，在