PARP-1-AIF介導(dǎo)的Parthanatos通路在戊二酸尿癥大鼠紋狀體損傷中的機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　通過(guò)慢性頸部皮下注射戊二酸建立戊二酸尿癥I型疾病狀態(tài)的大鼠模型，并腹腔注射PARP-1抑制劑（PJ34）對(duì)模型大鼠進(jìn)行預(yù)處理，HE染色觀察各組大鼠紋狀體神經(jīng)細(xì)胞的病理形態(tài)改變，蛋白質(zhì)印跡技術(shù)檢測(cè)紋狀體組織中Partnanatos通路的信號(hào)分子PARP-1和AIF蛋白表達(dá)水平，進(jìn)而從動(dòng)物水平探討Parthanatos通路在戊二酸致新生大鼠紋狀體損傷過(guò)程中的分子機(jī)制，以及PARP-1抑制劑對(duì)紋狀體神經(jīng)元的保護(hù)作用，篩選臨床

2、干預(yù)靶點(diǎn)，為其治療提供理論基礎(chǔ)，同時(shí)為此類單基因遺傳病的機(jī)制研究提供新思路。
　　方法：
　　1、新生雄性大鼠于生后第二天隨機(jī)分為5組：正常對(duì)照組（NS）、低劑量戊二酸組（ LGA）、高劑量戊二酸組（ HGA）、低劑量戊二酸+保護(hù)劑組（ PJ34）（LGA+PJ34）和高劑量戊二酸+保護(hù)劑組（HGA+PJ34）。
　　2、生后第4 d開(kāi)始，LGA組和HGA組分別以5μmol/g體重和10μmol/g體重的計(jì)量頸部皮下注

3、射戊二酸，NS組以5μmol/g體重頸部皮下注射生理鹽水，每天早7:30，下午15：00，晚10：30給藥，保護(hù)劑（PJ34）于每天第一次給藥前30min以10mg/kg的計(jì)量腹腔注射給藥，連續(xù)給藥20d（生后第23d），最后一次給藥12h后開(kāi)始取材，體重以三次測(cè)量均數(shù)為當(dāng)日體重。
　　3、HE染色觀察各組大鼠紋狀體神經(jīng)細(xì)胞病理形態(tài)變化，Western blot檢測(cè)各組大鼠紋狀體組織中PARP-1和AIF蛋白表達(dá)水平：10％的水合

4、氯醛麻醉大鼠后，斷頭取腦，冰上迅速剝離出紋狀體，置于液氮中，后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存中備用。用于HE染色的組織，大鼠麻醉后先行心臟灌注4%的多聚甲醛固定。
　　結(jié)果：
　　1、各組幼鼠存活率比較：出生23天（即連續(xù)GA皮下注射20天）后，LGA組9只幼鼠存活8只，存活率為88.89%（8/9），HGA組23只幼鼠僅存活5只，存活率僅為21.74%（5/23），HGA+PJ34組9只幼鼠存活7只，存活率為77.78%（7/9）

5、，LGA+PJ34組和NS組幼鼠均全部存活，存活率為100%。HGA組幼鼠存活率明顯低于其余各組，且在出生后2周內(nèi)死亡率較高，該組72.22%（13/18）的幼鼠均于生后2周內(nèi)死亡。出生2周后HGA組幼鼠死亡率降低，且LGA及HGA+PJ34組幼鼠在出生2周后無(wú)死亡。
　　2、各組幼鼠體重變化比較：生后4天各組幼鼠體重?zé)o明顯差異，隨著給藥時(shí)間的延長(zhǎng)，LGA和HGA組幼鼠體重明顯低于NS組，以HGA組明顯，PJ34干預(yù)組與NS組體重

6、無(wú)明顯差異，且HGA組和LGA組幼鼠體重亦分別低于相應(yīng)濃度GA+PJ34干預(yù)組。且出生20天后，各組幼鼠與生理鹽水組體重差異縮小，生后23天各組幼鼠體重比較，僅HGA組體重明顯低于NS組，且差異縮小，其余各組幼鼠體重比較無(wú)明顯差異。
　　3、紋狀體神經(jīng)元組織病理學(xué)觀察：HE染色發(fā)現(xiàn)HGA, HGA+PJ34, LGA和LGA+PJ34組紋狀體神經(jīng)細(xì)胞間質(zhì)水腫，胞質(zhì)空泡樣改變，血管周圍間隙增寬，且HGA組可見(jiàn)染色質(zhì)濃集、核碎裂，細(xì)胞

7、結(jié)構(gòu)排列混亂。
　　4、紋狀體神經(jīng)元PARP-1和AIF蛋白表達(dá)水平測(cè)定：Western Blot結(jié)果提示HGA、HGA+PJ34、LGA和LGA+PJ34組PARP-1和AIF蛋白表達(dá)含量與生理鹽水組相比均增高，且PJ34干預(yù)組PARP-1和AIF蛋白表達(dá)含量均低于相應(yīng)濃度GA皮下注射組。
　　結(jié)論：
　　1、長(zhǎng)期慢性頸部皮下注射戊二酸可能通過(guò)增加 PARP-1的表達(dá)以及誘導(dǎo)線粒體AIF的釋放，啟動(dòng)PARP-1依賴的