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文檔簡介
1、褪黑素(MEL)作為一種重要的激素,廣泛存在于神經(jīng)系統(tǒng)。在中樞神經(jīng)系統(tǒng),MEL主要由松果體分泌,而在視網(wǎng)膜,則由光感器合成并釋放。現(xiàn)有的報道顯示,MEL受體在視網(wǎng)膜中有廣泛的表達,提示MEL有可能作為一種神經(jīng)調(diào)質(zhì)調(diào)節(jié)脊椎動物視網(wǎng)膜的多種生理功能。
實驗室曾報道MEL可以調(diào)節(jié)鯽魚外層視網(wǎng)膜神經(jīng)元的生理功能,最近又報道MEL可顯著增強分離大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的甘氨酸電流。在本工作中,我們研究了MEL增強大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞甘氨酸電
2、流的胞內(nèi)信號機制。運用免疫熒光雙標技術標記逆標的大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞,結果顯示在大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞上僅有MT2受體的標記而沒有MT1受體的免疫標記。MEL對大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞甘氨酸電流的增大效應可以為MT2受體的特異阻斷劑4-P-PDOT所反轉。微電極胞內(nèi)透析G蛋白抑制劑GDP-β-S可以阻斷MEL對甘氨酸電流的增大作用。胞外預孵育PTX(百日咳毒素)使MEL不再增大甘氨酸電流,提示MEL通過激活PTX敏感的Gi/o型G蛋白實施其增
3、大甘氨酸電流的作用。
已有報道顯示,MEL激活MT2偶聯(lián)的Gi/o型G蛋白后,可能通過cAMP-PKA,cGMP-PKG和PLC/PKC信號通路發(fā)揮作用。為此,我們對這三條信號通路逐一進行檢驗。胞外施加PC-PLC特異性抑制劑D609,能阻斷MEL增大甘氨酸電流的效應,而PI-PLC抑制劑U73122則不能,提示PC-PLC而非PI-PLC參與了MEL的增大作用。PKC的激動劑PMA增大甘氨酸電流,在PMA存在時施加MEL則不
4、能使甘氨酸電流增大;PKC的阻斷劑BisⅣ能阻斷MEL對甘氨酸電流的增大作用,提示PKC對于MEL增大甘氨酸電流是必要的。當胞內(nèi)鈣離子為BAPTA所螯合時MEL這種增大作用不受影響,而且鈣成像結果顯示MEL施加時胞內(nèi)鈣離子幾乎沒有變化,因此鈣離子并不參與此增大效應。另一方面,8-Br-cAMP及8-Br-cGMP對大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞甘氨酸電流均無影響,且施加PKA的抑制劑H89及PKG的抑制劑KT5823皆未阻斷MEL對甘氨酸電流的增
5、大效應,因而cAMP-PKA和cGMP-PKG信號通路似乎并不參與MEL對甘氨酸電流的增大作用。本工作進一步顯示MEL可增大視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞接收的由甘氨酸能無長突細胞介導的抑制性光反應。
綜上,本工作表明,MEL激活偶聯(lián)Gi/o型G蛋白的MT2受體后,是通過PC-PLC/PKC信號通路實現(xiàn)對大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞甘氨酸電流的增大作用。進一步,在大鼠視網(wǎng)膜薄片上,MEL增大神經(jīng)節(jié)細胞上甘氨酸受體介導的光誘發(fā)的抑制性突觸后電流,這一
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