脂肪移植對自然衰老皮膚的作用及其與WNT通路相關機制的研究.pdf

1、本文主要從以下幾個部分展開論述：
　　第一部分：SD大鼠皮膚自然衰老模型的建立
　　目的：通過比較4周齡年輕大鼠與18個月齡年老大鼠背部皮膚相關指標的差異性，確定自然衰老大鼠皮膚模型的建立。
　　方法：取4周齡年輕組和18個月齡年老組大鼠背部皮膚組織，分別進行組織學H E染色、Masson染色和EVG染色，觀察皮膚組織學形態(tài)變化；并應用Image-Pro Plus6.0（IPP）專業(yè)圖形分析軟件計算皮膚組織中真皮層厚度

2、、膠原纖維和彈力纖維的相對面積值，并進行兩組間比較。測定4周齡年輕組與18個月齡年老組皮膚組織中超氧化物歧化酶（SOD）活力、過氧化脂質代謝產物丙二醛（MDA）和皮膚羥脯氨酸（Hyp）的含量。
　　結果：組織切片染色顯示SD大鼠年老組較年輕組皮膚層厚度變薄，膠原纖維面積和彈力纖維面積均減少，兩組間比較有統(tǒng)計學差異（n=5 P<0.05）。年老組皮膚組織中SOD和Hyp含量低于年輕組，而過氧化脂質代謝產物丙二醛（MDA）含量則是年老

3、組高于年輕組，兩組間差異用描述性統(tǒng)計學方法分析均值和標準差，具有統(tǒng)計學意義（n=5 P<0.05）。
　　結論：4周齡年輕組大鼠皮膚與18月齡的年老組大鼠皮膚存在較大差異，且年老組大鼠皮膚抗氧化能力下降，膠原纖維含量減少、染色變淺，彈力纖維減少、變形，有部分呈斷裂、纏結，可以作為自然衰老皮膚的實驗動物模型，進行后續(xù)實驗操作。
　　第二部分：脂肪移植對自然衰老皮膚的作用及其與WNT通路相關機制的研究
　　目的：研究大鼠自

4、體顆粒脂肪皮下注射移植對自然衰老皮膚的作用，并對其可能機制進行探討。
　　方法：將15只18個月齡雌性SD大鼠自體脂肪組織，經過顆?；幚砗?，采用自身對照的實驗方法，進行自體注射移植在大鼠左側背部皮下（隨機選取的一側），另一側不做任何處理。在一個月、二個月和三個月時間點，每次取5只老鼠分別切取處理部位皮膚組織和未做處理部位皮膚組織進行相關檢測。將注射處理部位皮膚組織作為實驗組，未做注射處理部位另一側皮膚作為對照組。一、脂肪移植后對

5、于組織形態(tài)的相關作用指標檢測：1）、分別進行實驗組與對照組的組織學HE染色、Masson染色、EVG染色三種特異性染色切片檢測，檢測其真皮厚度有無改變、膠原纖維和彈力纖維面積的變化情況；2）、利用特異性的化學方法分別對實驗組與對照組進行SOD、MDA和Hyp的檢測，分析脂肪移植后皮膚變化情況；3）、用分子生物學實驗技術Western blot和qRT-PCR檢測實驗組與對照組中COL I蛋白與其基因的表達，從而判斷自體脂肪移植對自然衰老

6、皮膚的促進年輕化作用。二、移植后的相關變化機制檢測：由分子生物學實驗技術Western blot方法檢測SD大鼠皮膚組織中Wnt/β-catenin信號傳導通路中 Wnt3a、β-catenin、TGF-β2三種蛋白的變化情況；并用qRT-PCR方法檢測β-catenin mRNA基因的表達情況，探討自體脂肪移植對自然衰老皮膚年輕化的作用。
　　結果：一、檢測的組織形態(tài)和相關指標結果；1）、所測的真皮厚度，在脂肪移植后實驗組較對照

7、組三個不同時間段，其改變量均有統(tǒng)計學意義（n=5 P<0.05）；所測的膠原纖維面積值，在脂肪移植后實驗組較對照組一個月和三個月時間段，其改變量有統(tǒng)計學意義（n=5 P<0.05）；二月時間段膠原纖維面積值，改變量無統(tǒng)計學意義（n=5 P>0.05）；檢測的彈力纖維面積值，在脂肪移植后實驗組較對照組一個月和二個月時間段，其改變量有統(tǒng)計學意義（n=5 P<0.05）；三月時間段，其變化無統(tǒng)計學意義（n=5 P>0.05）；2）、三個不同時

8、間段所測的SOD值升高、MDA值降低的變化結果，實驗組較對照組檢測值變化量，有統(tǒng)計學意義（n=5 P<0.05）；三個不同時間段Hyp的檢測結果，實驗組較對照組檢測值變化量，無統(tǒng)計學意義（n=5 P>0.05）；3）、WB實驗檢測COL I蛋白，三個不同時間段實驗組較對照組比較，其升高量有統(tǒng)計學意義（n=5 P<0.05）；qRT-PCR檢測COL I mRNA的表達值，實驗組較對照組三個不同時間段結果比較，無統(tǒng)計學意義（n=5 P>0

9、.05）；二、WB實驗檢測脂肪移植后與其作用機制相關的三種蛋白表達量，實驗組較對照組三個不同時間段結果比較，均有統(tǒng)計學意義（n=5 P<0.05）；qRT-PCR方法檢測的β-catenin mRNA基因表達，三個不同時間段實驗組較對照組比較其升高量，有統(tǒng)計學意義（n=5 P<0.05）.
　　結論：自體脂肪組織皮下注射移植后，能改善自然衰老的皮膚組織結構，促進膠原蛋白的生成，增強了皮膚的抗氧化能力；其機制可能是通過Wnt/β-c