Wnt5a對(duì)皮膚上皮作用的初步研究.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩60頁未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、皮膚的上皮細(xì)胞直接與外界接觸,通過不斷地更新為機(jī)體提供有效的保護(hù)屏障。皮膚的表皮由多層細(xì)胞構(gòu)成,基底層細(xì)胞增殖分裂能力強(qiáng),不斷地產(chǎn)生子代細(xì)胞向上分化,維持表皮的更新。毛囊是由上皮細(xì)胞和真皮細(xì)胞相互作用形成的皮膚的重要附屬器官之一,依靠周期性生長來實(shí)現(xiàn)毛發(fā)的更新。表皮及毛囊的更新受到多種信號(hào)途徑的調(diào)節(jié)。Wnt5a為非經(jīng)典途徑的代表,在皮膚創(chuàng)傷修復(fù)中發(fā)揮重要作用。近來有研究表明,Wnt5a能抑制毛囊毛干的生長。但Wnt5a在正常皮膚上皮中的

2、作用尚不清楚,有待我們探討。
   在本研究中,我們首先采用細(xì)胞計(jì)數(shù)和BrdU摻入分析法檢測(cè)Wnt5a對(duì)表皮細(xì)胞增殖的影響,然后采用半定量RT-PCR方法檢測(cè)Wnt非經(jīng)典途徑相關(guān)信號(hào)分子的改變,最后篩選在Wnt5a處理后有顯著差異的關(guān)鍵分子并檢測(cè)其在皮膚上皮中的表達(dá),旨在探討Wnt5a在上皮細(xì)胞中的作用及其機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)研究主要結(jié)果如下:
   1.利用HEK-293細(xì)胞擴(kuò)增腺病毒,獲得108PFU/ml的高滴度腺病毒Ad

3、-GFP、Ad-Wnt5a-GFP和Ad-Wnt10b-GFP。
   2.采用RT-PCR、細(xì)胞免疫熒光方法,表明Ad-Wnt5a-GFP和Ad-Wnt10b-GFP能有效感染JB6細(xì)胞。
   3.采用細(xì)胞計(jì)數(shù)、BrdU摻入分析法等方法分別檢測(cè)Ad-Wnt5a-GFP與Ad-GFP處理組細(xì)胞的增殖,表明Wnt5a能抑制表皮細(xì)胞的增殖。
   4.采用RT-PCR方法分別檢測(cè)Ad-Wnt5a-GFP和Ad-GF

4、P處理組細(xì)胞分化指標(biāo)(K10)的變化,表明Wnt5a能抑制表皮細(xì)胞的分化。
   5.采用RT-PCR、WB方法分別檢測(cè)Ad-GFP、Ad-Wnt5a-GFP、Ad-Wnt10b-GFP和Ad-Wnt5a-GFP+Ad-Wnt10b-GFP處理組細(xì)胞中β-catenin mRNA及蛋白的表達(dá),表明Wnt5a處理后抑制了細(xì)胞內(nèi)經(jīng)典Wnt/β-catenin信號(hào)的激活。
   6.采用RT-PCR方法檢測(cè)Ad-Wnt5a-G

5、FP和Ad-GFP處理組非經(jīng)典Wnt途徑相關(guān)信號(hào)分子的改變,結(jié)果表明Wnt5a處理JB6細(xì)胞后激活了非經(jīng)典Wnt信號(hào)通路。
   7.采用IHC方法觀察JNK在小鼠皮膚表皮中的表達(dá)情況,結(jié)果示JNK在小鼠表皮細(xì)胞有中等強(qiáng)度的表達(dá)。
   8.采用IHC方法檢測(cè)了Wnt5a蛋白和JNK蛋白在人頭皮皮膚中表皮中的表達(dá)情況。結(jié)果示: Wnt5a蛋白在表皮基底層細(xì)胞中表達(dá)最強(qiáng),基底上層表達(dá)逐漸減弱,JNK蛋白主要表達(dá)于基底上層。

6、
   9.采用IHC方法觀察JNK在生后完整毛囊周期中的表達(dá)情況。結(jié)果示JNK在毛囊周期中呈動(dòng)態(tài)表達(dá)。
   10.采用半定量RT-PCR和WB方法檢測(cè)了在小鼠毛囊周期JNKmRNA和蛋白的相對(duì)表達(dá)情況,與IHC的結(jié)果一致,證明了JNK在毛囊周期中的呈動(dòng)態(tài)表達(dá)。
   總之,我們通過一系列實(shí)驗(yàn)證明了Wnt5a在皮膚上皮細(xì)胞中的作用。首先我們檢測(cè)到Wnt5a抑制表皮細(xì)胞的增殖和分化,同時(shí)檢測(cè)到Wnt5a能激活非經(jīng)

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論