貴州苗藥“消疤草”預(yù)防肝纖維化及作用機理研究.pdf

1、目的：
　　為確證貴州苗藥“消疤草”預(yù)防肝纖維化功效，并探討其可能的作用機理。
　　方法:
　　Wistar大鼠90只，隨機分為正常對照組、模型組、陽性藥物（扶正化瘀膠囊0.525 g.kg-1）對照組，“消疤草”(Xiaobacao,XBC)高、中、低劑量組（“消疤草”煎液原液、1/5原液、1/10原液），每組15只。除正常對照組外，各組予30％乙醇灌胃、豬血清腹腔注射、40%CCl4葵花籽油溶液皮下注射，及喂飼高脂

2、飼料制造復合因素肝纖維化模型；實驗藥物配成一定濃度，于造模當天開始按1ml/100g體質(zhì)量進行灌胃預(yù)防肝纖維化，每日1次，連續(xù)8周，正常對照組與模型組大鼠每日予等體積的蒸餾水灌胃。實驗結(jié)束后，取股動脈血用自動生化儀檢測血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)、白蛋白(Albumin,ALB)；HE染色、Masson染色觀察

3、肝臟病理變化；ELISA法檢測血清基質(zhì)金屬蛋白酶-13(Matrix Metalloproteinase-13,MMP-13)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1(Tissue Inhibitor of Matrixmetalloproteinase-1,TIMP-1)；免疫組化法檢測肝組織Ⅰ型膠原(Cllagean-Ⅰ,Col-Ⅰ)、轉(zhuǎn)化生長因子-β1(Transfomling Gmwth Factor-beta1,TGF-β1)、α-平滑肌肌

4、動蛋白(α-SmoothMuscle Actin,α-SMA)；實時熒光定量PCR技術(shù)(Real time PCR,RT-PCR)檢測肝組織TGF-β1；Western blot檢測肝組織Smad3、Smad7蛋白。
　　結(jié)果：
　?、倥c各實驗組相比，模型組ALT、AST偏高，ALB偏低(P<0.05)，扶正化瘀組AST高于XBC中劑量組(P<0.05)，XBC各劑量之間ALT、AST、ALB含量差異無統(tǒng)計學意義。
　

5、　②模型組血清中MMP-13低于扶正化瘀組及各實驗藥物組，且XBC高劑量組明顯高于扶正化瘀組與低劑量組(P<0.05)。TIMP-1的結(jié)果則在正常對照組中水平最低，模型組水平最高(P<0.05)，扶正化瘀組與XBC各組相比較差異無意義，但 XBC高、低劑量組間差異顯著(P<0.05)。
　?、跦E染色、Masson染色結(jié)果示正常對照組大鼠肝臟未見明顯異常。模型組大鼠可見典型的肝纖維化、肝硬化形成，扶正化瘀組、XBC高、中劑量組同模

6、型組相比，肝臟炎癥程度減輕(P<0.05)，三組間無顯著差異；測定膠原面積比提示模型組明顯高于其他組(P<0.05)，扶正化瘀組的面積比值低于XBC干預(yù)組(P<0.05)；而XBC高劑量組膠原面積比值明顯低于中、低劑量組(P<0.05)。
　?、苊庖呓M化結(jié)果提示Col-Ⅰ、TGF-β1、α-SMA在正常對照組為弱陽性表達或幾乎不表達，平均光密度值(Average Optical Density,AOD)顯著低于其他組(P<0.05

7、)；模型組為強陽性表達，AOD最高，與其他各組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，扶正化瘀組與XBC高、中、低劑量組可見陽性細胞數(shù)目顯著減少，胞質(zhì)染色較淺，AOD居于正常對照組與模型組之間；扶正化瘀組與XBC高、中、低劑量組相比較，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，XBC煎液的各劑量組中，以高和(或)中劑量組降低最明顯。
　?、軷T-PCR示TGF-β1mRNA在正常對照組比其他各組表達水平低下(P<0.05)，模型組肝組織

8、中TGF-β1mRNA大量表達，與扶正化瘀組及XBC高、中、低劑量組比較差異顯著(P<0.05)；扶正化瘀組與XBC高、中、低劑量組間表達差異無統(tǒng)計學意義。
　　⑥模型組大鼠肝組織Smad3蛋白表達明顯增強，Smad7蛋白表達明顯減少；與模型組比較，扶正化瘀組與XBC各組的Smad3的表達量降低、Smad7的表達量增加，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；XBC高劑量組與中、低劑量組之間比較差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。