狗蟻草抗肝纖維化活性部位的篩選及其作用機(jī)制研究.pdf

1、目的:篩選狗蟻草抗肝纖維化活性部位并研究其抗肝纖維化的機(jī)制。
　　方法:采用石油醚、乙酸乙酯、氯仿、正丁醇、水、95％乙醇等溶劑提取，制備狗蟻草不同極性提取部位的小鼠含藥血清，通過(guò)MTT法檢測(cè)狗蟻草各提取物的小鼠含藥血清對(duì)肝星狀細(xì)胞(HepaticStellate T6 Cells，HSC-T6)細(xì)胞的增值作用，篩選出狗蚊草抗肝纖維化活性部位。
　　將小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、聯(lián)苯雙酯陽(yáng)性組(0.2mg·kg-1)、狗

2、蟻草乙酸乙酯部位高劑量組（相當(dāng)于生藥量40g·kg-1）、中劑量組（相當(dāng)于生藥量20g·kg-1）、低劑量組(相當(dāng)于生藥量10g·kg-1)，各組小鼠灌胃相應(yīng)藥物，1次/天，連續(xù)10天，分別用CCl4和D-DalN造成小鼠急性肝損傷模型，測(cè)定小鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Alanine aminotransferase，ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(Aspartatetransaminase，AST)含量，取小鼠肝臟制作HE染色病理切片觀察肝臟病變程度

3、，研究狗蟻草乙酸乙酯部位對(duì)急性肝損傷小鼠的保護(hù)作用。
　　將小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、秋水仙堿組(0.2mg·kg-1)、狗蟻草乙酸乙酯部位高劑量組（相當(dāng)于生藥量40g·kg-1）、中劑量組（相當(dāng)于生藥量20 g·kg-1）、低劑量組（相當(dāng)于生藥量10g·kg-1）。除對(duì)照組外，各組小鼠皮下注射CCl4，1次/3天，連續(xù)8周，造模同時(shí)，各組小鼠灌胃相應(yīng)藥物，1次/天，連續(xù)8周。第8周末，檢測(cè)各組小鼠血清ALT、AST含量和肝

4、組織超氧化物歧化酶(SuperoxideDismutase，SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(Glutathione peroxidase，GSH-Px)、丙二醛(MDA)、羥脯氨酸(Hyp)含量、Ⅰ型膠原蛋白(Collagen TypeⅠ，ColⅠ)、Ⅲ型膠原蛋白(Collagen TypeⅢ，ColⅢ)、Ⅳ型膠原蛋白(Collagen TypeⅣ，ColⅣ)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF-β1)、血小板衍生因子(Platelet-derived

5、 growth factor，PDGF)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(Tissue inhibitor of metalloproteinases1，TIMP-1)含量。制作肝組織HE染色和MASSON染色病理切片，觀察切片并進(jìn)行評(píng)分。采用RT-PCR方法檢測(cè)ColⅠ、ColⅡ、ColⅣ、TGF-β1、PDGF在肝臟中的基因表達(dá)情況。
　　結(jié)果:狗蟻草乙醇部位10％、乙酸乙酯部位10％、5％、2.5％含藥血清對(duì)HSC-T6的增殖有抑

6、制作用(P＜0.05)。
　　狗蟻草乙酸乙酯部位高劑量（相當(dāng)于生藥給藥量40g/kg）、中劑量（相當(dāng)于生藥給藥量20g/kg）、低劑量(相當(dāng)于生藥給藥量10g/kg)可以降低CCl4造成的急性肝損傷小鼠血清中ALT和AST的含量(P＜0.05);狗蟻草乙酸乙酯部位高劑量(40g/kg)、中劑量(20g/kg)可改善肝臟的病理?yè)p傷程度。乙酸乙酯部位高劑量(40g/kg)、中劑量(20g/kg)、低劑量(10g/kg)可降低D-Dal

7、N造成的急性肝損傷小鼠血清中ALT和AST含量(P＜0.05或P＜0.01);乙酸乙酯部位高劑量(40g/kg)、中劑量(20g/kg)可改善肝臟的病理?yè)p傷程度。
　　狗蟻草乙酸乙酯部位高劑量（相當(dāng)于生藥給藥量40g/kg）可降低CCl4所致肝纖維化小鼠的死亡率，減輕肝臟氣球樣變、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等病變程度，可降低肝臟膠原蛋白的生成，降低Ishak評(píng)分(P＜0.01)，降低血清中ALT和AST含量(P＜0.01)，降低肝臟中MDA、H

8、yp、ColⅠ、ColⅢ、ColⅣ、TGF-β1、PDGF等的含量(P＜0.05或P＜0.01)，降低ColⅠ、 ColⅢ、ColⅣ、TGF-β1、PDGF基因在肝臟中的轉(zhuǎn)錄(P＜0.01);狗蟻草乙酸乙酯部位中劑量（相當(dāng)于生藥給藥量20g/kg）可降低CCl4所致肝纖維化小鼠的死亡率，減弱肝臟氣球樣變、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)肝臟病變程度，降低肝臟膠原的增生，降低Ishak評(píng)分(P＜0.01)，降低血清中ALT和AST含量(P＜0.05或P＜0.

9、01)，降低肝臟中MDA、Hyp、ColⅠ、ColⅣ、TGF-β1、PDGF的含量(P＜0.05或P＜0.01)，降低ColⅠ、ColⅢ、TGF-β1、PDGF在肝臟中的轉(zhuǎn)錄(P＜0.05或P＜0.01);狗蟻草乙酸乙酯部位低劑量（相當(dāng)于生藥給藥量10g/kg）可以降低CCl4所致肝纖維化小鼠的死亡率，降低血清中ALT和AST含量（P＜0.05或P＜0.01），降低肝臟Hyp含量（P＜0.01），降低PDGF在肝臟中的表達(dá)（P＜0.01