DENV-2感染小鼠ANA-1巨噬細胞補體mRNA動態(tài)和細胞極化的初探.pdf

1、目的：探討DENV-2對小鼠ANA-1巨噬細胞胞內(nèi)補體相關(guān)組分mRNA和細胞極化動態(tài)的影響。
　　方法:用C6/36細胞增殖DENV-2，RT-PCR鑒定病毒，TCID50滴定病毒效價。分別以LPS/IL-4體外刺激小鼠ANA-1細胞3h、8h、12h及24h，Real-time PCR法檢測IL-1β、CCL2、Arg-1細胞極化指標的變化，檢測胞內(nèi)C3、CfB、CRIg、C1q補體成分mRNA的動態(tài)。用DENV-2感染M0/M

2、2極化的ANA-1巨噬細胞，Real-time PCR檢測細胞的極化指標、NS1基因和Mavs抗病毒基因的表達，以及胞內(nèi)補體C3、CRIg、C1q mRNA的動態(tài)。
　　結(jié)果：
　　1）細胞極化后補體mRNA動態(tài)：刺激3h后LPS組IL-1β、CCL2 mRNA表達上調(diào)，12h達高峰；IL-4組中以Arg-1 mRNA表達上調(diào)顯著，于24h達高峰，提示LPS組細胞向M1方向極化，IL-4組向M2方向極化。兩極化組的相應補體組

3、分均表現(xiàn)為不同程度的上調(diào)，其中：①C1q、C3在ANA-1向M2極化8h后上調(diào)顯著，12h時達高峰（2-ΔΔct分別為94.9±12.9和11.3±2.4）；②CfB因子在M1極化組中上調(diào)顯著，12h表達上調(diào)達高峰（2-ΔΔct為61.4±6.2）；③CRIg在兩組中均在24h時表達上調(diào)且具有顯著性差異（P<0.05）。
　　2）DENV-2感染M0/M2狀態(tài)的ANA-1細胞后補體mRNA動態(tài)：①感染后C1q mRNA表達均受抑制

4、，且M2感染組比M0感染組C1q表達均較高（差異具有統(tǒng)計學意義）；②3h時M2感染組C3 mRNA表達受抑制，12h時上調(diào)2-ΔΔct為5.08±2.25。與M0感染組相比，12h和24h時兩組間差異有統(tǒng)計學意義；③除12h檢測點外，DENV-2感染后CRIg表達均上調(diào)或在正常水平。④DENV-2感染后M2細胞CfB基因表達均被下調(diào)，但與感染 M0組比較兩組無明顯差異。
　　3）DENV-2感染后M0/M2狀態(tài)的ANA-1細胞后細

5、胞極化的動態(tài): DENV-2感染M0細胞后IL-1β、CCL2和Arg-1表達均受抑制，Arg-1基因于24h時恢復正常。DENV感染逆轉(zhuǎn)M2細胞Arg-1基因的表達。
　　4）感染后胞內(nèi)NS1、Mavs mRNA的動態(tài)：24h內(nèi)各感染組間NS1和Mavs基因的表達差異無統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論：
　　1）不同極化ANA-1細胞表達補體成分mRNA不同：M1極化細胞較高表達CfB，M2極化細胞高表達C1q、C3和CRIg