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文檔簡(jiǎn)介
1、由于各種原因而導(dǎo)致異常的液體積貯于肺間質(zhì)或肺泡內(nèi),此時(shí)的病癥稱為急性肺水腫,它的臨床癥狀主要表現(xiàn)為呼吸困難。肺泡上皮細(xì)胞可以發(fā)揮兩個(gè)作用,一是可以促進(jìn)分泌肺泡表面活性物質(zhì),二是可以主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)Na+,增進(jìn)肺泡腔內(nèi)的液體向細(xì)胞間隙運(yùn)輸,進(jìn)而促進(jìn)液體的吸收。因此,肺泡正常功能的發(fā)揮與肺泡上皮細(xì)胞之間有著十分重要的關(guān)聯(lián)。近些年來人們發(fā)現(xiàn)維生素D不僅可以參與抑制炎癥反應(yīng)的發(fā)生、增殖和修復(fù)肺上皮細(xì)胞,它也可以通過調(diào)控小鼠肺組織的上皮鈉通道(epith
2、elial sodium channel,ENaC)的活性而提高小鼠肺臟內(nèi)液體清除,但目前尚無實(shí)驗(yàn)證實(shí)維生素D類似物對(duì)急性肺水腫的具體機(jī)制。因此,深入研究ENaC功能活動(dòng)及炎癥反應(yīng)對(duì)于減輕肺水腫有著十分必要的臨床意義。本實(shí)驗(yàn)旨在探討維生素D類似物與小鼠急性肺水腫之間的關(guān)系,以及ENaC表達(dá)與炎癥因子的釋放在其中的介導(dǎo)作用,以明確其在急性肺水腫中的作用機(jī)制。
目的:
一、探討維生素D類似物對(duì)急性肺水腫小鼠生存時(shí)間、肺組
3、織病理學(xué)變化的影響。
二、檢測(cè)維生素D對(duì)急性肺水腫小鼠的肺濕干重比、心肺系數(shù)及肺指數(shù)的影響。
三、檢測(cè)維生素D類似物對(duì)急性肺水腫小鼠肺組織ENaC的mRNA和蛋白水半表達(dá)的影響。
四、檢測(cè)維生素D類似物對(duì)急性腫水腫小鼠炎癥因子的影響。
方法:
一、選擇健康雄性BALB/c小鼠28只,隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照(Control)組、帕立骨化醇(paricalcitol,Pari)組、脂多糖(li
4、popolysaccharides,LPS)組、LPS+Pari組,每組各7只。四組小鼠預(yù)處理14天,其中Control組和LPS組小鼠每隔一天進(jìn)行腹腔注射給藥200 ng/kg的溶媒1,2丙二醇(1,2-propanediol,PE);Pari組和LPS+Pari組兩組小鼠每隔一天進(jìn)行腹腔注射給藥200 ng/kg的Pari(活性維生素D類似物)。第14天,用15 mg/kg的LPS給藥LPS組和LPS+Pari組;0.9%NaCl,
5、15 mg/kg給藥Control組和Pari組。分析各組小鼠生存時(shí)間,觀察小鼠肺組織濕干重比,心肺系數(shù)及肺指數(shù)。
二、肺組織切片應(yīng)用蘇木精-伊紅染色(hematoxylin-eosin staining,HE)法觀察肺組織形態(tài)學(xué)變化。
三、采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCT)的方法和免疫印跡(western blot,
6、WB)法檢測(cè)維生素D類似物對(duì)α-ENaC,γ-ENaC的mRNA及蛋白水平的影響。
四、應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)的方法檢測(cè)血清中腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的水平,以及髓過氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的活性。
結(jié)果
7、:
一、維生素D類似物能夠延長(zhǎng)急性肺水腫小鼠的生存時(shí)間(P<0.05),肺泡間隔減小,炎癥程度減輕,病理?yè)p傷改善。
二、維生素D類似物預(yù)處理的急性肺水腫相對(duì)于PE預(yù)處理的對(duì)照急性肺水腫小鼠濕干重比、心肺系數(shù)及肺指數(shù)降低。
三、維生素D類似物能夠增加急性肺水腫小鼠肺組織中α-ENaC和γ-ENaC的mRNA及蛋白的表達(dá)(P<0.05)。
四、維生素D類似物能夠使急性肺水腫小鼠血清中TNF-α、IL-
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