維生素D類似物對(duì)小鼠UUO模型腎間質(zhì)纖維化的影響.pdf

1、目的：
　　慢性腎臟疾病（Chronic kidney disease，CKD）是腎單位結(jié)構(gòu)遭到破壞，造成腎功能逐漸喪失，最終發(fā)生不可逆的腎衰竭的疾病。CKD發(fā)現(xiàn)晚，人群中發(fā)病率高、治療費(fèi)用昂貴、住院率高、死亡率高，在威脅人類健康方面排名第一。
　　CKD進(jìn)展到終末期的組織學(xué)特點(diǎn)是發(fā)生腎間質(zhì)纖維化(Renal interstitialfibrosis，RIF)。公認(rèn)的RIF模型是單側(cè)輸尿管梗阻(Unilateral uret

2、eral obstruction,UUO)。在研究RIF的發(fā)病規(guī)律及機(jī)制方面，它應(yīng)用較普遍。
　　活性維生素D類似物減輕RIF、抑制炎癥和上皮細(xì)胞—間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化(Epithelial to mesenchymal transition，EMT)發(fā)生是通過(guò)維生素D受體。本實(shí)驗(yàn)探討維生素D類似物—Paricalcitol和RO-27-5646對(duì)C57BL/6小鼠UUO模型腎間質(zhì)纖維化的作用。
　　方法：
　　1、C57

3、BL/6雄鼠20只，體重18-22 g，分四組:對(duì)照組即假手術(shù)組（Control）;UUO模型組(Vehicle);UUO模型藥物處理組1:給予Paricalcitol(Paricalcitol);UUO模型藥物處理組2:給予RO-27-5646（RO-27-5646）。腹腔注射給藥，兩種藥物每次劑量都是300 ng/kg，每周三次，給藥三周。UUO模型組和對(duì)照組給予等劑量的60％丙二醇。給藥一周后，取血和建立UUO模型。除了對(duì)照組，其

4、它三組都要結(jié)扎輸尿管。造模結(jié)束，取血和取結(jié)扎（左）腎。
　　2、采取HE染色檢測(cè)腎組織病理變化，通過(guò)Masson染色檢測(cè)腎組織纖維化程度。
　　3、采用免疫熒光法檢測(cè)腎臟中纖維連接蛋白(Fibronetin，F(xiàn)N)、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(Alpha-smooth muscle actin，α-SMA)的表達(dá)。
　　4、采用Western blot法檢測(cè)腎臟中α-SMA蛋白的表達(dá)，采用Real time PCR法檢測(cè)腎臟中

5、α-SMA mRNA的表達(dá)。
　　5、血鈣水平是采取原子吸收分光光度法進(jìn)行檢測(cè)。
　　結(jié)果：
　　1、造模時(shí)間內(nèi)即21天中每組小鼠平均體重變化趨勢(shì)。每組小鼠平均體重變化率，Vehicle組變化最大，RO-27-5646組次之，Control組體重變化率最小。造模結(jié)束，Control組腎臟形態(tài)沒(méi)發(fā)生改變，其他三組結(jié)扎側(cè)腎臟皮質(zhì)變薄。
　　2、HE染色結(jié)果:Vehicle組，細(xì)胞間結(jié)構(gòu)雜亂，疏松。Paricalcit

6、ol和RO-27-5646兩組病理改變程度較Vehicle組減輕，且RO-27-5646組與Control組比較腎組織病理改變無(wú)明顯差異。Masson染色結(jié)果:Vehicle組，上皮細(xì)胞出現(xiàn)大量壞死，藍(lán)染分布廣，且顏色重。Paricalcitol和RO-27-5646兩組纖維化程度較Vehicle組減輕，且RO-27-5646組纖維化程度最輕。
　　3、免疫熒光檢測(cè)效果:Control組腎臟中FN、α-SMA的表達(dá)正常。與Vehi

7、cle組相比，Paricalcitol和RO-27-5646兩組腎組織中FN、α-SMA的表達(dá)量有下降。
　　4、Western blot和Real time PCR結(jié)果:Control組腎組織中α-SMA mRNA和蛋白幾乎不表達(dá)。與Vehicle組比較，Paricalcitol和RO-27-5646兩組腎組織中α-SMA mRNA和蛋白的表達(dá)都有下降，但是RO-27-5646組α-SMA蛋白下降較Paricalcitol組明顯