ATAD2基因對宮頸癌增殖和侵襲遷移能力影響的相關研究.pdf

1、目的：
　　本研究旨在探討ATAD2在宮頸癌組織和細胞株中的表達情況及與宮頸癌發(fā)生發(fā)展、侵襲轉移的關系，為臨床治療提供新的思路及依據(jù)。研究的第一部分，在組織和細胞水平上檢測ATAD2的表達水平，分析其與臨床病理學特征的關系;研究的第二部分，通過RNAi技術下調(diào)ATAD2表達的宮頸癌細胞株，觀察對其增殖、凋亡和細胞周期的影響;研究的第三部分，通過RNAi技術下調(diào)ATAD2表達的宮頸癌細胞株，觀察對其遷移、侵襲能力的影響，揭示ATAD

2、2與宮頸癌發(fā)生發(fā)展、侵襲轉移的關系，探討ATAD2潛在的臨床應用價值。
　　方法：
　　1、實驗對象
　　中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院接受治療的患者，宮頸癌組織標本135例、CIN組織標本60例。30例宮頸癌新鮮組織標本和30例癌旁正常宮頸組織采自于手術切除30分鐘內(nèi)。全部患者均知情同意并經(jīng)中國醫(yī)科大學倫理委員會批準。正常宮頸細胞株，宮頸癌細胞株HeLa、SiHa，C33a。
　　2、實驗方法
　　(1)免疫組

3、織化學檢測135例宮頸癌、60例宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變、30例正常宮頸組織中ATAD2蛋白表達。
　　(2)Western Blot檢測ATAD2蛋白在30例宮頸癌癌組織和30例配對癌旁組織中的表達。
　　(3)細胞培養(yǎng):宮頸癌細胞株常規(guī)培養(yǎng)。
　　(4)免疫熒光檢測ATAD2在HeLa、SiHa細胞中的定位。
　　(5)應用RNAi技術下調(diào)靶基因ATAD2的表達。
　　(6)應用平板克隆實驗檢測ATAD2表達

4、下調(diào)后，HeLa、SiHa細胞克隆形成能力的變化。
　　(7)應用CCK8檢測ATAD2表達下調(diào)后，HeLa、SiHa細胞增殖能力的變化。
　　(8)應用流式細胞儀檢測ATAD2表達下調(diào)后，HeLa、SiHa細胞周期和凋亡情況的變化。
　　(9)應用Transwell實驗檢測ATAD2表達下調(diào)后，HeLa、SiHa細胞侵襲能力的變化。
　　(10)應用細胞劃痕實驗檢測ATAD2表達下調(diào)后，HeLa、SiHa細胞遷

5、移能力的變化。
　　結果：
　　1、ATAD2在宮頸癌中的表達
　　(1)免疫組化檢測結果說明宮頸癌組織ATAD2表達水平與正常宮頸組織比較有統(tǒng)計學差異(P＜0.05);結合臨床資料進一步研究表明ATAD2高表達與腫瘤分期、淋巴結轉移密切相關(P＜0.05)。
　　(2)Western Blot結果顯示，ATAD2在宮頸癌組織中的表達水平高于癌旁正常宮頸組織(P＜0.05)，進一步實驗顯示ATAD2在宮頸癌細胞株

6、HeLa和SiHa中表達顯著升高。
　　2、ATAD2基因表達下調(diào)后對宮頸癌細胞增殖、凋亡和細胞周期的影響
　　(1)選取ATAD2高表達的人宮頸癌細胞株HeLa和SiHa，免疫熒光結果顯示ATAD2蛋白于細胞核、胞漿中皆有表達。
　　(2)下調(diào)ATAD2基因表達后，平板克隆實驗及CCK8檢測結果表明HeLa和SiHa細胞克隆形成能力和增殖能力下降，細胞周期實驗結果顯示HeLa和SiHa細胞周期阻滯于G1/S期，細胞凋

7、亡能力提高。
　　3、ATAD2基因表達下調(diào)后對宮頸癌細胞侵襲、遷移能力的影響
　　(1)沉默表達ATAD2基因，Transwell實驗結果顯示，HeLa和SiHa細胞侵襲能力下降。
　　(2)沉默表達ATAD2基因，細胞劃痕實驗結果顯示，HeLa和SiHa細胞遷移能力下降。
　　結論：
　　1.ATAD2基因在宮頸癌組織及細胞中呈高表達，且與腫瘤分期等臨床病理特征密切相關。
　　2.下調(diào)ATAD2基