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文檔簡介
1、卵巢癌是婦科常見的三大惡性腫瘤之一,由于卵巢癌發(fā)病和進展隱匿,早期多無明顯癥狀,缺乏普查和行之有效的措施,就診時70%已屬晚期。目前,卵巢癌的治療方法有手術(shù)、化療、放療及生物治療等,但是5年生存率徘徊在30%左右。上皮性卵巢癌(Epithelial ovarian cancer, EOC)是卵巢癌中最常見類型,也是婦科腫瘤中病死率最高的腫瘤類型,其病死率高于其他所有婦科腫瘤之和。究其根源,對卵巢癌的早期診斷困難,目前還沒有有效的基因治療
2、靶點,是導(dǎo)致治療失敗的主要原因,并導(dǎo)致患者預(yù)后不良。研究表明,卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展是一個多步驟、多因素參與的復(fù)雜過程,因此,從分子水平積極尋找卵巢癌相關(guān)的腫瘤標(biāo)志物,對于研究卵巢癌的發(fā)病機制并探尋新的生物治療靶點具有重要的意義。
ATAD2(ATPase family AAA domain containing protein2)基因,又名ANCCA(AAA+ nuclear coregulator cancer associa
3、ted)基因?qū)儆?,ATP酶基因家族,定位于人8q24,其主要特點是,其編碼蛋白由一個約220個氨基酸組成的保守序列,包含一個ATP酶結(jié)合位點。該家族蛋白都至少包含一個或兩個AAA(ATPaseassociated with diverse celluar activities)結(jié)構(gòu)域。由ATAD2編碼的蛋白都含有2個AAA結(jié)構(gòu)域和一個溴區(qū)(Bromodomain)結(jié)構(gòu)域。AAA家族蛋白一般作為分子伴侶,通常執(zhí)行協(xié)助裝配,操作或分解蛋白質(zhì)
4、復(fù)合物的功能。溴區(qū)結(jié)構(gòu)域是進化上高度保守的由110個氨基酸組成的蛋白質(zhì)功能結(jié)構(gòu)域,可特異識別組蛋白末端乙?;馁嚢彼嵛稽c,通過染色質(zhì)的組裝和乙?;瘏⑴c信號依賴性的基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控,也可通過轉(zhuǎn)錄因子非轉(zhuǎn)錄蛋白的乙?;揎椂鴱V泛參與細胞周期調(diào)控、細胞分化、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等過程。溴區(qū)結(jié)構(gòu)域蛋白通過組蛋白的乙酰化的失調(diào)控參與了惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。目前ATAD2在上皮性卵巢癌的研究很少,深入研究ATAD2在上皮性卵巢癌中的作用機理,為上皮性卵巢癌的治療提
5、供新的分子靶點。
目的:
本研究旨在探討ATAD2在上皮性卵巢癌中表達與臨床病理特征的關(guān)系、卵巢癌的預(yù)后分析及其在卵巢細胞系中的生物學(xué)行為,為臨床治療提供新的思路及依據(jù)。研究的第一部分,我們在組織水平上檢測ATAD2的表達水平,分析其與臨床病理特征的關(guān)系;研究的第二部分,通過基因沉默ATAD2表達,觀察對其增殖和侵襲能力的影響,揭示ATAD2與上皮性卵巢癌發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系。
方法:
一、實
6、驗對象
2008年1月~2013年12月,中國醫(yī)科大學(xué)病理科上皮性卵巢癌患者癌和正常卵巢組織配對組織病理切片110對;2013年1月~2013年12月,30例卵巢癌新鮮組織標(biāo)本和30例正常卵巢組織;1株正常卵巢上皮細胞HOSEpiC,2株卵巢癌細胞OVCAR3、HO8910。
二、實驗方法
1.免疫組織化學(xué)SP法檢測卵巢癌和正常卵巢組織中ATAD2蛋白表達水平。
2.細胞培養(yǎng):人卵巢癌細胞株和人正
7、常卵巢上皮細胞常規(guī)培養(yǎng)。
3.Real Time PCR檢測ATAD2基因mRNA在組織和細胞水平的表達。
4.Western blot檢測3株細胞及卵巢癌和正常卵巢組織中ATAD2蛋白表達。
5.應(yīng)用MTT實驗檢測ATAD2沉默表達后細胞增殖能力的變化。
6.應(yīng)用Transwell實驗檢測ATAD2沉默表達后卵巢癌細胞侵襲遷移能力變化。
7.應(yīng)用細胞周期試劑盒檢測ATAD2沉默表達后卵
8、巢癌細胞周期變化。
結(jié)果:
第一部分 ATAD2在上皮性卵巢癌中的表達及臨床意義
1.免疫組化結(jié)果顯示,ATAD2在卵巢癌組織中高表達。
2.Western Blot結(jié)果與PCR結(jié)果趨勢一致,ATAD2在上皮性卵巢癌高表達。
3.卵巢癌組織ATAD2表達變化與臨床病理特征相關(guān)性顯示,ATAD2表達與腫瘤分期、網(wǎng)膜轉(zhuǎn)移、腹水及CA125(p<0.05)密切相關(guān);而與年齡、病理類型、病理分級
9、、殘余腫瘤大小無明顯相關(guān)(p>0.05)。
4.Kaplan-Meier生存曲線結(jié)果表明:ATAD2低表達的患者生存狀態(tài)較好,ATAD2高表達的患者生存狀態(tài)較差。
5.Cox模型多因素分析結(jié)果表明, ATAD2的表達和CA-125,生存率的關(guān)鍵因素。
第二部分 基因沉默ATAD2在卵巢癌細胞中的生物學(xué)特征
1.Real Time PCR及Western Blot結(jié)果顯示,ATAD2在2株卵巢癌細胞
10、中的表達水平高于正常卵巢上皮細胞HOSEpiC,且在OVCAR3細胞株表達明顯升高。
2.沉默表達ATAD2基因,Transwell和MTT實驗結(jié)果顯示,兩株細胞侵襲及遷移能力下降;CCK8及平板克隆實驗表明細胞增殖能力及克隆形成能力下降;細胞周期實驗結(jié)果顯示沉默表達ATAD2基因,細胞周期未發(fā)現(xiàn)陽性結(jié)果。
結(jié)論:
1.我們發(fā)現(xiàn)相對正常卵巢組織,ATAD2卵巢癌組織表達明顯升高。
2.ATAD2的
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