RUNX3在宮頸癌組織中的表達(dá)及其對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞增殖活性的影響.pdf

1、研究背景：
　　宮頸癌（CervicalCancer）是發(fā)展中國(guó)家婦女最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率已成為女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的首位，嚴(yán)重威脅女性的健康及生命。近年來(lái)，隨著社會(huì)生活的變化，宮頸癌的發(fā)病率呈現(xiàn)明顯的年輕化趨勢(shì)，它的危害性不容忽視。從正常的宮頸上皮，到宮頸上皮內(nèi)瘤變（cervicalintraepithelialneoplasia,CIN），直至宮頸癌是一個(gè)長(zhǎng)期的、復(fù)雜的發(fā)展過(guò)程，對(duì)其病因?qū)W的研究一直是國(guó)內(nèi)外的熱點(diǎn)，它

2、的發(fā)病機(jī)制至今尚未完全闡明。學(xué)者們普遍認(rèn)為高危型HPV（humanpapillomaviruses,人乳頭瘤病毒）感染是其主要病因，但并非唯一因素，而是多種致病因素共同作用的結(jié)果。許多國(guó)內(nèi)外研究表明，宮頸癌的發(fā)生與抑癌基因有著密切的關(guān)系。
　　人類runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子3（runt-relatedtranscriptionfactorgene3,RUNX3）是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一個(gè)新的抑癌基因，是RUNX轉(zhuǎn)錄因子家族成員之一。近年來(lái)研究發(fā)

3、現(xiàn)，它在胃癌、肺癌、胰腺癌、肝細(xì)胞癌、結(jié)直腸癌等多種腫瘤組織中的表達(dá)明顯低于正常組織，且與腫瘤的分化程度相關(guān)。腫瘤的惡性程度越高，其表達(dá)量越低。RUNX3基因在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移以及預(yù)后等多個(gè)方面的研究已成為國(guó)內(nèi)外的熱點(diǎn)問(wèn)題。RUNX3基因的表達(dá)沉默或下調(diào)通常伴隨著腫瘤的發(fā)生，并且表達(dá)水平與惡性腫瘤的臨床分期、細(xì)胞分化程度、癌細(xì)胞是否轉(zhuǎn)移等情況密切相關(guān)。而RUNX3基因與宮頸癌的關(guān)系目前尚未見(jiàn)報(bào)道。
　　國(guó)內(nèi)外研究表明，RUN

4、X3基因的啟動(dòng)子CPG島的高甲基化是其主要失活機(jī)制。5-氮雜-2'-脫氧胞苷（5-Aza-CdR）是一種DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑，它能通過(guò)去甲基化作用使抑癌基因重新表達(dá)并恢復(fù)抑癌功能。
　　因此，本課題旨在通過(guò)研究抑癌基因RUNX3在宮頸癌組織中的表達(dá)情況，揭示RUNX3基因在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的作用，并通過(guò)發(fā)揮5-氮雜-2'-脫氧胞苷的去甲基化作用使RUNX3基因恢復(fù)表達(dá)來(lái)進(jìn)一步探討RUNX3基因?qū)m頸癌Hela細(xì)胞增殖活性的

5、影響。
　　研究目的：
　　1.從組織水平探討抑癌基因RUNX3在宮頸不同病理狀態(tài)下表達(dá)水平的差異性，探討其與宮頸癌的關(guān)系；
　　2.通過(guò)DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-氮雜-2'-脫氧胞苷誘導(dǎo)宮頸癌Hela細(xì)胞恢復(fù)RUNX3基因表達(dá)后，觀察Hela細(xì)胞增殖能力及凋亡等生物學(xué)行為的變化，進(jìn)一步探討RUNX3與宮頸癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系，為宮頸癌的早期診斷和治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　研究方法：
　　1.依次采用免疫組織化

6、學(xué)法、WesternBlotting方法及半定量RT-PCR法檢測(cè)宮頸癌、宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）及正常宮頸組織中RUNX3的表達(dá)情況。
　　2.用5-氮雜-2'-脫氧胞苷處理宮頸癌Hela細(xì)胞，采用半定量RT-PCR方法檢測(cè)RUNX3基因表達(dá)情況，并通過(guò)MTT法、流式細(xì)胞儀技術(shù)及克隆形成實(shí)驗(yàn)分析腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為的變化。
　　研究結(jié)果：
　　1.免疫組化結(jié)果提示，RUNX3蛋白在宮頸癌組織中呈現(xiàn)低表達(dá)，與宮頸上皮內(nèi)

7、瘤變、正常宮頸上皮組表達(dá)水平三者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；在宮頸癌臨床分期Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期中表達(dá)水平呈現(xiàn)遞減趨勢(shì)，且三者之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組RUNX3蛋白低表達(dá)，與未轉(zhuǎn)移組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；
　　2.通過(guò)蛋白印跡實(shí)驗(yàn)，證實(shí)RUNX3蛋白在宮頸癌組織中低表達(dá)，與正常宮頸上皮組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；
　　3.半定量RT-PCR結(jié)果顯示，RUNX3mRNA在宮頸癌

8、組織中低表達(dá)，與正常宮頸上皮組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；
　　4.對(duì)照組Hela細(xì)胞未能檢測(cè)到RUNX3mRNA的表達(dá)，而經(jīng)過(guò)5-Aza-CdR處理后Hela細(xì)胞RUNX3mRNA則恢復(fù)表達(dá)，表達(dá)水平與用藥劑量存在著量效關(guān)系；
　　5.經(jīng)過(guò)5-Aza-CdR處理后，Hela細(xì)胞的生長(zhǎng)增值活性明顯抑制，并且隨著5-Aza-CdR的濃度增加其抑制的量效關(guān)系明顯；
　　6.經(jīng)5-Aza-CdR處理后，Hela細(xì)胞凋亡