AG490對人宮頸癌Hela細(xì)胞增殖及侵襲性的影響及機(jī)制.pdf

1、目的：探討JAK2激酶(Janus kinase2，JAK2)特異性抑制劑AG490(tyrphosin AG490)對人宮頸癌Hela細(xì)胞增殖，凋亡及侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響及其機(jī)制。 方法：(1)培養(yǎng)宮頸癌Hela細(xì)胞，觀察活細(xì)胞生長情況并攝片，同時(shí)繪制細(xì)胞的生長曲線。(2)實(shí)驗(yàn)分組：終濃度為25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L的酪氨酸激酶抑制劑AG490培養(yǎng)Hela細(xì)胞。(3)MTT比色法檢測培養(yǎng)24 h，48

2、 h，72 h后細(xì)胞的增殖活力，并計(jì)算細(xì)胞生長抑制率；(4)流式細(xì)胞儀檢測24 h，48 h，72 h后細(xì)胞凋亡的發(fā)生率，并分析細(xì)胞周期改變。(5)運(yùn)用蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)檢測AG490作用的Hela細(xì)胞中信號(hào)傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3(Signal transducers and activators of transcription3，STAT3)、磷酸化STAT3(P-STAT3)、基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)和

3、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)蛋白的表達(dá)。 結(jié)果：AG490能有效抑制體外培養(yǎng)的Hela細(xì)胞增殖，該抑制作用具有濃度與時(shí)間依賴性的特點(diǎn)；AG490誘導(dǎo)宮頸癌Hela細(xì)胞凋亡，且隨作用時(shí)間延長，凋亡率增加；AG490可阻止Hela細(xì)胞G1期向S期的轉(zhuǎn)化，細(xì)胞周期主要被阻滯于G1期；AG490能抑制p-STAT3， MMP-2，VEGF蛋白在Hela細(xì)胞中的表達(dá)。 結(jié)論： 1.宮頸癌Hela細(xì)胞系中JAK2/STAT3

4、信號(hào)通路持續(xù)活化。 2.JAK2激酶抑制劑AG490可以抑制Hela細(xì)胞增殖，具有濃度和時(shí)間依賴性。 3.JAK2激酶抑制劑AG490使凋亡細(xì)胞明顯增多，呈時(shí)間依賴性，可阻止Hela細(xì)胞G1期向S期的轉(zhuǎn)化，細(xì)胞主要被阻滯在G1期。 4.JAK2激酶抑制劑AG490可以下調(diào)Hela細(xì)胞中P-STAT3，MMP-2和VEGF的表達(dá)，抑制宮頸癌Hela細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力。 5.AG490通過阻斷JAKs/STAT