Angiopoietin調控宮頸癌增殖侵襲及血管生成的研究.pdf

1、目的:
　　血管緊張素及其受體主要特異性表達于血管內(nèi)皮細胞。本課題組前期人宮頸組織免疫組化顯示Ang1和Ang2及其受體Tie2在宮頸癌細胞中高表達，本實驗旨在明確血管生成素對宮頸癌惡性生物學行為的影響。
　　方法:
　　1.免疫細胞化學（ICC）染色和實時熒光定量PCR（RT-PCR）檢測正常宮頸上皮細胞及宮頸癌細胞系SiHa、Hela、C33A中Ang1、Ang2及Tie1、Tie2的表達。
　　2.外源性人

2、重組Ang1（rhAng1）及Ang2（rhAng2）用于上調 Ang1、Ang2的水平；小干擾RNA（siAng1和siAng2）轉染下調Hela細胞中Ang1、Ang2的表達。
　　3.利用EDU細胞增殖實驗、集落形成實驗、Ki-67增殖實驗檢測經(jīng)上述處理后宮頸癌細胞增殖能力的變化。
　　4.利用劃痕實驗及Transwell遷移實驗檢測處理后宮頸癌細胞遷移能力的變化。
　　5.利用Transwell侵襲實驗檢測處理

3、后宮頸癌細胞侵襲能力的變化。
　　6.動物實驗
　　(1)選取24只Balb/c裸鼠，皮下注射3×106Hela細胞成瘤后隨機分為4組,分別瘤內(nèi)注射：①5％葡萄糖（溶劑對照組）；②5%葡萄糖和in vivo-jetPEI（體內(nèi)轉染試劑對照組）；③in vivo-jetPEI和siAng1（siAng1組）；④in vivo-jetPEI和siAng2（siAng2組）。隔天測量移植瘤的徑線長度（包括長、短徑），根據(jù)長短徑計算

4、腫瘤的體積，利用體積數(shù)據(jù)繪成腫瘤的增長曲線。
　　(2)免疫組織化學法檢測四組移植瘤中Ang1、Ang2及波形蛋白（Vimentin）的表達情況。
　　(3)免疫組織化學法-免疫熒光（IF）檢測血管內(nèi)皮黏蛋白Endomucin及平滑肌肌動蛋白α-SMA在各組移植瘤血管中的表達情況，評價血管數(shù)量及血管完整性。
　　結果:
　　1.宮頸癌細胞中Ang1、Ang2及Tie1、Tie2在mRNA和蛋白水平的表達均明顯高于

5、正常宮頸上皮（P<0.01）。
　　2.rhAng1及rhAng2刺激后，宮頸癌細胞的遷移及侵襲能力增強（P<0.05），而增殖能力無顯著的改變。
　　3.在Hela細胞中下調Ang1后，其遷移及侵襲能力均下降（P<0.05），下調Ang2后，細胞遷移能力下降，而細胞侵襲能力及增殖能力沒有明顯改變。
　　4.動物實驗：與對照組相比，siAng1組及siAng2組移植瘤的生長受到抑制（P＜0.01）；
　　5.與對