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文檔簡介
1、研究背景:腹膜透析(peritoneal dialysis,以下簡稱PD)是終末期腎病(end-stage renaldisease,ESRD)的主要腎臟替代治療方法之一。腹透相關(guān)腹膜炎是腹膜透析最常見的感染性并發(fā)癥,嚴重者可引起腹透技術(shù)失敗,甚至死亡。細菌學培養(yǎng)是腹透相關(guān)腹膜炎診斷的可靠依據(jù)。然而,傳統(tǒng)的細菌培養(yǎng)有周期長、陽性率偏低、易受抗生素使用影響等不足。因此,尋找能快速、有效鑒定菌種的新方法具有重要意義。近年來,以16S rDN
2、A為基礎(chǔ)的分子生物學技術(shù)因快速、靈敏、準確等優(yōu)點在各類疾病的菌種鑒定中尤受青睞。16S rDNA是原核生物核糖體中16S rRNA對應(yīng)的基因序列,既有高度保守性,又具有一定變異性。利用保守區(qū)域設(shè)計通用引物或特異探針,再利用可變區(qū)的差異鑒別菌種,這就是此類分子生物技術(shù)的基本原理。
研究目的:探討基于16S rDNA的基因測序在腹透相關(guān)腹膜炎早期診斷中的臨床應(yīng)用價值。
實驗方法:本研究選取69例腹透相關(guān)腹膜炎的腹膜透析透
3、出液標本作為研究對象,選取16S rDNA保守區(qū)的通用引物27F/1492R進行PCR擴增,對擴增所得的目的基因進行測序及序列比對確定細菌,最后與常規(guī)培養(yǎng)法相比較。此外,取18例腹透病人的正常腹膜透析透出液作為對照組,予上述測序方法及常規(guī)培養(yǎng)鑒定有無細菌。
結(jié)果:在69例腹透相關(guān)腹膜炎的腹膜透析透出液標本中,測序法鑒定病原菌的陽性率(71%,49/69)雖然高于常規(guī)培養(yǎng)法(63.8%,44/69),但未達統(tǒng)計學顯著性差異(P>
4、0.05)。在44例培養(yǎng)陽性的標本中,測序法的一致性為72.7%(32/44)。在25例培養(yǎng)陰性的標本中,測序法鑒定出8例菌株,追蹤病史可知其中3例患者在前一次/后一次腹膜炎感染時常規(guī)培養(yǎng)證實有相同的病原菌感染,剩余5例患者有培養(yǎng)陰性的腹膜炎記錄或未再發(fā)生腹膜炎。在有近期抗生素使用史的18例標本中,測序法的陽性率(61.1%、11/18)高于常規(guī)培養(yǎng)法(50%,9/18),但未達統(tǒng)計學顯著性差異(P>0.05)。作為對照組的18例腹膜透
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