基于16SrDNA的基因測(cè)序在腹透相關(guān)腹膜炎早期診斷中的應(yīng)用.pdf

1、研究背景:腹膜透析(peritoneal dialysis，以下簡稱PD)是終末期腎病(end-stage renaldisease，ESRD)的主要腎臟替代治療方法之一。腹透相關(guān)腹膜炎是腹膜透析最常見的感染性并發(fā)癥，嚴(yán)重者可引起腹透技術(shù)失敗，甚至死亡。細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)是腹透相關(guān)腹膜炎診斷的可靠依據(jù)。然而，傳統(tǒng)的細(xì)菌培養(yǎng)有周期長、陽性率偏低、易受抗生素使用影響等不足。因此，尋找能快速、有效鑒定菌種的新方法具有重要意義。近年來，以16S rDN

2、A為基礎(chǔ)的分子生物學(xué)技術(shù)因快速、靈敏、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)在各類疾病的菌種鑒定中尤受青睞。16S rDNA是原核生物核糖體中16S rRNA對(duì)應(yīng)的基因序列，既有高度保守性，又具有一定變異性。利用保守區(qū)域設(shè)計(jì)通用引物或特異探針，再利用可變區(qū)的差異鑒別菌種，這就是此類分子生物技術(shù)的基本原理。
　　研究目的:探討基于16S rDNA的基因測(cè)序在腹透相關(guān)腹膜炎早期診斷中的臨床應(yīng)用價(jià)值。
　　實(shí)驗(yàn)方法:本研究選取69例腹透相關(guān)腹膜炎的腹膜透析透

3、出液標(biāo)本作為研究對(duì)象，選取16S rDNA保守區(qū)的通用引物27F/1492R進(jìn)行PCR擴(kuò)增，對(duì)擴(kuò)增所得的目的基因進(jìn)行測(cè)序及序列比對(duì)確定細(xì)菌，最后與常規(guī)培養(yǎng)法相比較。此外，取18例腹透病人的正常腹膜透析透出液作為對(duì)照組，予上述測(cè)序方法及常規(guī)培養(yǎng)鑒定有無細(xì)菌。
　　結(jié)果:在69例腹透相關(guān)腹膜炎的腹膜透析透出液標(biāo)本中，測(cè)序法鑒定病原菌的陽性率(71％，49/69)雖然高于常規(guī)培養(yǎng)法(63.8％，44/69)，但未達(dá)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異(P＞

4、0.05)。在44例培養(yǎng)陽性的標(biāo)本中，測(cè)序法的一致性為72.7％(32/44)。在25例培養(yǎng)陰性的標(biāo)本中，測(cè)序法鑒定出8例菌株，追蹤病史可知其中3例患者在前一次/后一次腹膜炎感染時(shí)常規(guī)培養(yǎng)證實(shí)有相同的病原菌感染，剩余5例患者有培養(yǎng)陰性的腹膜炎記錄或未再發(fā)生腹膜炎。在有近期抗生素使用史的18例標(biāo)本中，測(cè)序法的陽性率(61.1％、11/18)高于常規(guī)培養(yǎng)法(50％，9/18)，但未達(dá)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異(P＞0.05)。作為對(duì)照組的18例腹膜透