基于16SrDNA與CFP10基因的qPCR技術(shù)在脊柱結(jié)核診斷中的初步應(yīng)用.pdf

1、目的：探討及推廣熒光定量PCR技術(shù)在脊柱結(jié)核診斷中的應(yīng)用。
　　方法：選擇結(jié)核分枝桿菌16SrDNA和CFP10兩個(gè)基因作為本次實(shí)驗(yàn)的靶基因，分別設(shè)計(jì)兩對(duì)特異性的引物，應(yīng)用SYBR Green I法（熒光染料法）建立熒光定量PCR反應(yīng)體系，依據(jù)基因數(shù)據(jù)庫中所提供的兩種基因的保守序列，利用人工化學(xué)合成法獲得目的基因，構(gòu)建重組質(zhì)粒體pGH-16SrDNA和pGH-CFP10，并對(duì)重組質(zhì)粒體進(jìn)行酶切鑒定和序列測(cè)定，成功構(gòu)建陽性標(biāo)準(zhǔn)品，并

2、制作出標(biāo)準(zhǔn)曲線及曲線方程，最后用此方法對(duì)20例臨床確診為脊柱結(jié)核患者的血漿標(biāo)本以及20例非脊柱結(jié)核患者的血漿標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)與定量。
　　結(jié)果：本次實(shí)驗(yàn)中所建立的熒光定量方法線性關(guān)系好，均呈線性負(fù)相關(guān)。兩個(gè)基因（16SrDNA和CFP10）的標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)分別達(dá)到0.999和0.998，實(shí)驗(yàn)中最低檢測(cè)下限分別達(dá)到1.48×101copies/ul和2.67×101copies/ul，而且特異性好，兩條基因的溶解曲線均呈現(xiàn)單一的峰值