2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題（含答案詳解+作文范文）_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的：利用 PCR、酶切及藍(lán)白斑篩選技術(shù)，通過(guò)野生型、突變型質(zhì)?；旌夏M不同比例檢測(cè)EGFR基因19外顯子缺失突變，建立一種快速、靈敏、廉價(jià)的 EGFR基因診斷技術(shù)。
　　方法：根據(jù)EGFR基因19外顯子del E746-A750和del L747–S752 ins S缺失突變，即15堿基和18堿基缺失突變?yōu)闄z測(cè)靶點(diǎn)，分別設(shè)計(jì)相關(guān)配對(duì)引物，構(gòu)建野生型及突變型質(zhì)粒模版；設(shè)計(jì)一組特異性PCR引物，并以EGFR野生型、突變型質(zhì)粒為模板模

2、擬實(shí)際標(biāo)本中野生型與突變型基因比例，進(jìn)行插入片段的 PCR擴(kuò)增；結(jié)合藍(lán)白斑篩選技術(shù)原理，野生型閱讀框架中因含有終止密碼子 TAA，菌落呈白色，缺失突變型因丟失特定的一段核酸片段而不含有終止密碼子 TAA，故菌落呈現(xiàn)藍(lán)色，以此確定樣品有無(wú)EGFR基因19外顯子的缺失突變；通過(guò)限制性內(nèi)切酶酶切野生型片段，可以減少白色菌落克隆數(shù)量，間接富集突變型DNA，提高檢測(cè)效率。
　　結(jié)果：EGFR基因野生型插入片段分子克隆的菌落為白色，突變型插入

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