利用PCR-SSCP檢測(cè)ZEN對(duì)大鼠睪丸中p53基因第八外顯子突變的研究.pdf

1、玉米赤霉烯酮(zearlenone)又稱為F-2雌性發(fā)情毒素,是由玉米赤霉菌、禾谷鐮刀菌,三線鐮刀菌等產(chǎn)生的具有雌激素作用的真菌毒素,主要污染小麥、大麥、燕麥、玉米等農(nóng)作物及動(dòng)物飼料.玉米赤霉烯酮能引起母畜子宮肥大和陰道上皮角質(zhì)化,公豬接觸玉米赤霉烯酮后出現(xiàn)"雌性化"癥狀,給廣大養(yǎng)殖戶、豬場(chǎng)造成很大的影響.因而探討飼料中玉米赤霉烯酮對(duì)生殖細(xì)胞基因變異及蛋白表達(dá)對(duì)繁殖帶來(lái)的影響,如何減小飼料中霉菌毒素對(duì)動(dòng)物繁殖和生長(zhǎng)性能的影響有十分重要意

2、義.本研究通過(guò)對(duì)各組大鼠灌服不同劑量的玉米赤霉烯酮,攻毒24h以后,進(jìn)行了大鼠睪丸DNA的提取.提取的DNA通過(guò)0.8％瓊脂糖凝膠電泳的定性鑒定和核酸檢測(cè)儀的定量鑒定,結(jié)果表明:所提取的DNA純度較高,含量在170ug/ml左右,適合于做PCR的模板.針對(duì)p53基因第八外顯子進(jìn)行了PCR反應(yīng),反應(yīng)產(chǎn)物通過(guò)0.8％瓊脂糖凝膠電泳的定性純度鑒定,對(duì)照DNA分子標(biāo)準(zhǔn)物,結(jié)果表明:所得到的PCR產(chǎn)物的分子量大小為200bp左右,表明產(chǎn)物均一,與

3、預(yù)測(cè)所得產(chǎn)物198bp十分接近,說(shuō)明所得產(chǎn)物即為大鼠p53基因的第八外顯子片段.本實(shí)驗(yàn)用所得PCR產(chǎn)物通過(guò)非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行了SSCP分析,表明不同劑量的玉米赤霉烯酮都對(duì)大鼠p53基因的第八外顯子的構(gòu)象產(chǎn)生了影響,而且可能對(duì)p53基因的堿基序列產(chǎn)生了作用,引起了該外顯子的基因突變.實(shí)驗(yàn)的最后我們對(duì)PCR產(chǎn)物回收后進(jìn)行基因測(cè)序,通過(guò)對(duì)所得到的p53基因第八外顯子序列進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)其確實(shí)發(fā)生了基因的突變.突變主要發(fā)生在基因的5'端