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文檔簡介
1、背景:膿毒癥(Sepsis)是機體對嚴重感染的全身性過度炎癥反應綜合征(Systemic Inflammatory Response Syndrome,SIRS)所導致的可以威脅生命的多臟器功能不全綜合征(Multiple Organ Dysfunction Syndrome, MODS),已成為臨床主要死亡原因之一。膿毒癥時會發(fā)生心功能不全,其原因之一是心肌細胞轉化為促炎癥狀態(tài)。動力相關蛋白1(Dynamin-related prot
2、ein1,Drp1)是一種介導線粒體分裂的蛋白,目前未見關于Drp1在膿毒癥中對心肌細胞轉化為促炎癥狀態(tài)影響的相關研究。
目的:探索動力相關蛋白1在膿毒癥心肌細胞轉化為促炎癥狀態(tài)中的作用。
方法:動物研究:取12只3-4月齡SD大鼠(雌雄不拘),隨機分為3組。以3 g/kg的劑量向大鼠腹腔注射大鼠盲腸內容物(180 mg/mL)制備膿毒癥模型;對照組大鼠腹腔注射(i.p.)生理鹽水;抑制劑組接受線粒體分裂抑制劑(Md
3、ivi-1,25 mg/kg,i.p.)預處理1 h后腹腔注射盲腸內容物。6 h后觀察大鼠心肌組織切片白細胞浸潤程度并采用酶聯免疫吸附法( Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)測定心肌組織髓過氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)活性。并收集對照組、膿毒癥大鼠血漿用于刺激心肌細胞。細胞研究:使用膿毒癥及對照組血漿刺激相應組乳鼠心肌細胞,抑制劑組則先接受Mdivi-1(10μmol/
4、L)預處理1h后接受膿毒癥大鼠血漿刺激。分別采用實時熒光定量聚合酶鏈式反應(Real Time Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)和酶聯免疫吸附法分別檢測脂多糖誘導趨化因子(LPS-induced CXC Chemokine, LIX)以及角質細胞起源趨化因子(Keratinocyte-derived Chemokine, KC) mRNA及蛋白的表達與釋放。免疫蛋白印跡法(Western Blottin
5、g,WB)檢測膿毒癥大鼠血漿刺激后Drp1在絲氨酸637(Serine637)位點的去磷酸化程度及其向線粒體的遷移情況。
結果:研究顯示膿毒癥大鼠心肌間質白細胞較對照組浸潤增加且MPO活性顯著升高(P<0.05);Drp1抑制劑(Mdivi-1,25mg/kg)預處理可顯著減少膿毒癥大鼠心肌間質白細胞浸潤程度(P<0.05)并明顯降低 MPO活性(P<0.05)。膿毒癥血漿刺激心肌細胞引起趨化因子(LIX、KC)較對照組表達、
6、釋放增加(P<0.05)。Mdivi-1(10μmol/L)預處理心肌細胞可顯著抑制膿毒癥大鼠血漿刺激的心肌細胞趨化因子表達及釋放(P<0.05)。膿毒癥大鼠血漿刺激心肌細胞可導致 Drp1于S637位點顯著去磷酸化(P<0.05),以及Drp1由胞質遷移至線粒體(P<0.05),而Mdivi-1(10μmol/L)預處理可抑制Drp1在S637位點的去磷酸化(P<0.05),以及Drp1由胞質至線粒體的遷移(P<0.05)。
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