AngⅡ對人腎小管上皮細胞線粒體動力學蛋白Drp1及Mfn1表達影響.pdf

1、背景:糖尿病腎臟疾病(diabetic kidney disease，DKD)是糖尿病最常見的微血管并發(fā)癥之一，是導致終末期腎臟疾病(end-stage renaldisease，ESRD)的最主要原因。在DKD的發(fā)病機制中，腎臟線粒體損傷成為近年研究熱點。已有研究表明，在高糖作用下，腎臟細胞線粒體動力學發(fā)生改變。Drp1和Mfn1是調控線粒體動力學的兩種重要蛋白。腎素-血管緊張素系統(tǒng)(Renin-Angiotensin System，

2、RAS)在DKD發(fā)生和進展中發(fā)揮十分重要作用，大量研究證明，血管緊張素Ⅱ(AngiotensinⅡ，AngⅡ)是RAS系統(tǒng)中關鍵效應因子。目前，關于動力學蛋白Drp1及Mfn1在糖尿病腎臟疾病患者腎組織表達情況以及AngⅡ對腎小管上皮細胞Drp1及Mfn1表達影響國內外還尚未見報道。
　　 目的：
　　 觀察動力學蛋白Drp1和Mfn1在糖尿病患者腎臟組織的表達情況。研究AngⅡ對人近曲腎小管上皮細胞(HK-2)Drp1

3、及Mfn1表達的影響。
　　 方法：
　　 1、隨機選取經臨床和腎臟病理確診為糖尿病腎臟疾病患者(10例)及微小病變患者(7例)。采用PASM、PAS、 HE染色觀察腎臟普通病理改變;免疫組化檢測腎臟組織Drp1和Mfn1表達變化。采用Pearson相關分析檢測Drp1、Mfn1與蛋白尿、肌酐相關性。
　　 2、常規(guī)培養(yǎng)HK-2細胞，以不同濃度AngⅡ刺激24小時，RealTime PCR及Western Blo

4、t分別從基因及蛋白水平檢測AngⅡ對HK-2細胞Drp1和Mfn1表達的影響。以高濃度AngⅡ刺激HK-2細胞，RealTime PCR及Western Blot檢測不同時間點Drp1及Mfn1水平的變化。
　　 結果：
　　 1、糖尿病腎臟疾病患者腎組織病理改變:HE和PAS，PASM染色顯示，與對照組患者腎臟組織比較，糖尿病腎臟疾病患者腎小球系膜中-重度增生，多個節(jié)段呈結節(jié)狀硬化，基底膜增厚僵硬，部分腎小管代償性擴張

5、，可見上皮細胞脫落。
　　 2、糖尿病腎臟疾病患者腎組織Drp1、Mfn1表達:免疫組化顯示:糖尿病腎臟疾病患者腎小管上皮細胞有明顯Drp1及Mfn1表達，且Drp1表達上調，而Mfn1表達下調(P＜0.05); Drp1與蛋白尿、肌酐呈正相關，Mfn1與蛋白尿、肌酐呈負相關(P＜0.05)。
　　 3、AngⅡ誘導人近曲腎小管上皮細胞Drp1、Mfn1表達影響:在不同濃度(10-14μM-10-6μM) AngⅡ的刺激

6、下，Drp1 mRNA及蛋白表達較對照組相比明顯增加，且呈劑量和時間依賴性(P＜0.01)，Mfn1mRNA及蛋白表達明顯降低，且呈劑量和時間依賴性(P＜0.01)。
　　 結論：
　　 1、糖尿病腎臟疾病患者腎臟組織Drp1、Mfn1表達異常，表現(xiàn)為Drp1表達上調，Mfn1表達下調;Drp1表達與患者蛋白尿，肌酐存在正相關，Mfn1表達與患者蛋白尿、肌酐存在負相關。
　　 2、外源性血管緊張素Ⅱ可誘導人近曲腎