自吞噬對(duì)膿毒癥乳鼠心肌細(xì)胞活性及線粒體膜電位的影響.pdf

1、目的：觀察自吞噬在LPS 致膿毒癥心肌抑制中的作用，并探討其對(duì)心肌細(xì)胞活性和線粒體功能的影響。
　　 方法：以體外培養(yǎng)的1-3天的乳鼠原代心肌細(xì)胞作為研究對(duì)象，單用脂多糖（LPS）刺激或預(yù)加自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤（3-MA）(10mM）干預(yù)后再予以LPS 刺激。實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分為四組：（1）陰性對(duì)照組:常規(guī)心肌細(xì)胞培養(yǎng)，不予任何處理；（2）LPS組:給予LPS,按檢測(cè)要求調(diào)整培養(yǎng)時(shí)間；（3）3MA+LPS組：預(yù)先給予10mM3MA

2、作用48h后，加入LPS，按檢測(cè)要求調(diào)整培養(yǎng)時(shí)間；（4）3MA組：只給予10mM3MA48h的預(yù)處理，不做其他處理。利用Western Blot 檢測(cè)自噬體膜標(biāo)志性蛋白質(zhì)LC3-II/LC3-I 比值的變化以評(píng)價(jià)自噬形成，用MTT 法檢測(cè)細(xì)胞活力，流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定線粒體膜電位（MMP）。
　　 結(jié)果：與對(duì)照組相比，LPS 作用呈劑量依賴性抑制細(xì)胞活力，當(dāng)LPS 濃度達(dá)到5ug/ml（P<0.05）和10ug/ml 時(shí)（P<0.01

3、），細(xì)胞活性被明顯抑制；LPS 作用2h時(shí)，自噬體膜標(biāo)志性蛋白質(zhì)LC3II/LC3I 比值明顯提高（P<0.05），于8h 時(shí)其表達(dá)達(dá)到峰值（P<0.01），而于24h 時(shí)蛋白表達(dá)有所回落，但仍然高于對(duì)照組（P<0.05）；LPS 作用2h 時(shí)線粒體膜電位顯著降低（P<0.01）,持續(xù)到本實(shí)驗(yàn)觀察點(diǎn)8h(P<0.05),隨著作用時(shí)間延長(zhǎng)，膜電位有回升的趨勢(shì)，到24h 觀察點(diǎn)時(shí)，膜電位基本回到基線水平。與LPS組比較，預(yù)先給預(yù)3-MA 再

4、給予不同濃度LPS，3-MA 可顯著抑制不同濃度LPS 作用下心肌細(xì)胞活性（P<0.05）。此時(shí)自噬體膜標(biāo)志性蛋白質(zhì)LC3II/I 明顯降低（P<0.05）。在2h,4h,8h 時(shí)3MA 對(duì)LPS 作用下的MMP 無顯著作用，但16h,24h 時(shí)3MA 顯著降低LPS 作用下MMP（P<0.01）。
　　 結(jié)論：LPS 可以誘導(dǎo)自噬發(fā)生，并可顯著降低乳鼠心肌細(xì)胞活性及線粒體膜電位。而抑制自噬可以加重這種損害。說明自噬在膿毒癥心肌