結直腸癌中RNF43基因突變的病理意義.pdf

1、結直腸癌是嚴重威脅人類健康的惡性消化道腫瘤之一，對結直腸癌發(fā)病機制以及防治策略的研究具有十分重要的現(xiàn)實意義。在經(jīng)典的正常上皮-腺瘤-腺癌序列中Wnt通路激活是重要的早期環(huán)節(jié)，對Wnt通路信號強度調(diào)控的研究有助于闡明結直腸癌的發(fā)病機制。
　　環(huán)指蛋白43(Ring finger protein43，RNF43)是Wnt信號通路中重要的負向調(diào)控因子之一，具有清除細胞膜Wnt受體以及阻滯TCF4(T cell factor4)入核的功能

2、，在通路中發(fā)揮Wnt信號抑制作用。RNF43的異常表達、突變等改變對Wnt信號通路的活化程度有重大影響，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有密切聯(lián)系，在臨床可能具有較為重要的意義。有研究報道RNF43的突變在高頻微衛(wèi)星不穩(wěn)定(High-frequencymicrosatellite instability，MSI-H)的腫瘤中發(fā)生頻率較高，其突變情況與微衛(wèi)星不穩(wěn)定性相關。RNF43的截短突變絕大多數(shù)發(fā)生在MSI-H情況下且與APC突變極少同時發(fā)生。這提示

3、RNF43功能缺失對Wnt通路激活程度的影響很可能是MSI類型結直腸癌發(fā)生機制中重要的一環(huán)，對其基因突變情況及微衛(wèi)星不穩(wěn)定情況的綜合分析可能有助于闡明其在臨床的功能效應。對比在微衛(wèi)星穩(wěn)定/微衛(wèi)星不穩(wěn)定病例中RNF43基因的改變情況與臨床參數(shù)、預后之間的差異，有助于尋找新的預測標志物、為個體化治療提供指導，具有重要的實際應用價值和理論意義。KRAS/BRAF的突變狀態(tài)與微衛(wèi)星不穩(wěn)定狀態(tài)均可以作為預測預后的指標，且均與耐藥存在關聯(lián)，因此我們

4、還對其與KRAS/BRAF突變狀態(tài)的關聯(lián)進行了分析，以深入探討RNF43對預后可能存在的效應。
　　本次研究選取的446例散發(fā)性結直腸癌樣本均取自經(jīng)福爾馬林固定-石蠟包埋的患者手術切除組織。RNF43的基因外顯子區(qū)段存在多個微衛(wèi)星位點，根據(jù)RNF43突變與微衛(wèi)星不穩(wěn)定性的相關性推測，這些位點可能具有較高的突變率。因此我們先篩選出RNF43外顯子序列上存在的這些微衛(wèi)星位點并設計了針對性引物，在提取樣本基因組DNA后，用PCR方法對這

5、些微衛(wèi)星區(qū)段進行擴增，并使用Sanger測序方法對這些位點的突變情況進行了檢測。之后我們運用SPSS軟件(version20)分析了這些病例中RNF43突變與微衛(wèi)星不穩(wěn)定性狀態(tài)、KRAS、BRAF等基因的突變情況（由本實驗室在之前基于焦磷酸測序技術和多重熒光PCR-毛細管電泳的臨床分子檢測方法獲得）、患者的臨床病理學參數(shù)（性別、年齡、腫瘤部位、浸潤深度、大體類型和組織學類型、淋巴結轉移及遠處轉移、TNM分期等）、預后生存數(shù)據(jù)等信息的相關

6、性。我們還對RNF43在腫瘤組織的表達做了免疫組化檢測，并分析了RNF43突變對其表達情況的影響。本次研究試圖闡明RNF43在結直腸癌人群中的突變情況，探討RNF43基因突變情況與上述各因素之間的聯(lián)系，分析這些改變情況與臨床參數(shù)的關聯(lián)及對預后的影響。
　　本次研究共發(fā)現(xiàn)結直腸癌人群中存在p.Gly659fs、p.Arg117fs、c.350G＞A、c.816T＞C四種RNF43基因的突變，其總體突變頻率分別為9.2％、1.1％、5

7、4.5％、0.91％。p.Gly659fs在MSI-H狀態(tài)下的突變率為28.6％，在MSI-L/MSS狀態(tài)下的突變率為3.1％。 p.Arg117fs在MSI-H狀態(tài)下的突變率為3.6％，未在MSI-L/MSS狀態(tài)下發(fā)現(xiàn)此種突變。c.350G＞A的突變率在不同微衛(wèi)星狀態(tài)下未發(fā)現(xiàn)差異。發(fā)現(xiàn)p.Gly659fs與腫瘤部位（位于結腸、位于右半大腸）相關，與組織學類型（粘液腺癌）、組織學分化（低分化）相關，攜帶此突變的患者較少發(fā)生遠處轉移;c.

8、350G＞A與組織學類型（腺癌）、組織學分化（高分化）相關，這些相關性體現(xiàn)在此位點發(fā)生純合突變的情況下，而此位點發(fā)生雜合型突變時其各項臨床參數(shù)相比未突變組則均無差異。當患者攜帶RNF43基因的p.Gly659fs突變時，再發(fā)生BRAF突變的患者五年生存率低于無BRAF突變者。暫未發(fā)現(xiàn)RNF43的突變與其在腫瘤組織的表達之間存在相關性。
　　本次研究目前可以得出以下結論:
　　1、RNF43在結直腸癌中突變率高。
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