寧夏地區(qū)散發(fā)性結(jié)直腸癌APC基因突變研究.pdf

1、目的：通過熒光標記的數(shù)字化PTT、DHPLC和DNA直接測序?qū)幭牡貐^(qū)散發(fā)性結(jié)直腸癌APC基因的不同外顯子進行檢測，研究本地區(qū)APC基因的突變位點及突變類型，分析 APC基因突變在散發(fā)性結(jié)直腸癌發(fā)病中的作用及與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系，同時探討熒光標記的數(shù)字化PTT在截短型APC基因突變檢測中的應(yīng)用價值，為結(jié)直腸癌早期診斷和早期治療提供理論依據(jù)。
　　方法：（1）樣本來源：收集寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院結(jié)直腸外科手術(shù)切除的無家族史結(jié)直腸癌患

2、者腫瘤組織標本150例、正常組織標本30例（遠離腫瘤10cm處的腸壁），同時收集相應(yīng)的臨床資料；（2）實驗方法：①采用變性高效液相色譜技術(shù)（Denaturing high performance liquid chromatography，DHPLC）對APC基因第1～14外顯子進行篩查，篩查出的突變樣本進行測序；②采用熒光標記的數(shù)字化蛋白截短檢測技術(shù)（Protein truncation test， PTT）對50例結(jié)直腸癌組織的AP

3、C基因第15外顯子的截短型突變進行篩查，篩查出的突變樣本進行測序；③采用聚合酶鏈式反應(yīng)（Polymerase chain reaction， PCR）DNA直接測序法對APC基因15外顯子檢測；（3）實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理：方法采用卡方檢驗，以α=0.05為檢驗水準，運用SPSS18.0統(tǒng)計軟件包，對散發(fā)性結(jié)直腸癌組織APC基因的突變與臨床病理參數(shù)之間的相關(guān)性及熒光標記的數(shù)字化蛋白截短檢測技術(shù)和PCR-DNA直接測序在截短型突變檢出率上的比較

4、進行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　結(jié)果：（1）采用DHPLC和DNA直接測序，100例腫瘤組織中發(fā)現(xiàn)34例體細胞突變，突變率34％（34/100），新發(fā)現(xiàn)兩個突變位點(c.3374T>C p.Val1125Ala, c.3811T>G p.Phe1271Val)，截短型突變占總突變率的77.1％(27/35)），以無義突變?yōu)橹?7.8％（21/27）。（2）熒光標記的數(shù)字化PTT檢出15例截短型突變樣本，突變率為30％（15/50），對5例樣

5、本進行測序分別為（c.4099C>T, c.3925G>T, c.1450 C>T, c.2976_2977 insT），均導(dǎo)致截短蛋白的產(chǎn)生；（3）APC基因突變情況與結(jié)直腸癌的部位、組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、Dukes分期、CEA水平無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；（4）熒光標記的數(shù)字化PTT具有快速、高效的特點和PCR-DNA直接測序在截短型突變檢出率上的比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（X2=0.083，P>0.05）。
　　結(jié)論