基于高通量功能細(xì)胞庫(kù)篩選的新型選擇性激酶小分子抑制劑的發(fā)現(xiàn)及生物機(jī)制研究.pdf

1、蛋白激酶的功能獲得性突變或過度表達(dá)是導(dǎo)致癌癥的重要因素之一。近年來，針對(duì)蛋白激酶的小分子抑制劑研究也逐漸成為抗癌藥物研究中備受矚目的方向，特別是2001年Imatinib在臨床試驗(yàn)上所取得的巨大成功，使得激酶抑制劑作為一類靶點(diǎn)明確，毒副作用較輕的新型抗癌藥物迅速躋身于抗癌治療的一線藥物中。然而隨著激酶抑制劑在臨床上的大規(guī)模應(yīng)用，它們的局限性也不斷顯現(xiàn)出來，如選擇性不高而導(dǎo)致的脫靶性毒副作用及長(zhǎng)期用藥后產(chǎn)生的獲得性耐藥等問題。因此，開發(fā)選

2、擇性高，能克服耐藥性突變的新型小分子激酶抑制劑具有重要的基礎(chǔ)研究意義和臨床應(yīng)用價(jià)值。此外，盡管目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了將近530種蛋白激酶，但是許多蛋白激酶在人體內(nèi)的生理和病理功能尚不明確，發(fā)展針對(duì)這些激酶的高選擇性小分子抑制劑將有助于人們揭示這些激酶的新的作用機(jī)制并發(fā)現(xiàn)新的疾病治療靶點(diǎn)。
　　本研究基于以激酶為靶點(diǎn)的BaF3功能細(xì)胞庫(kù)，采用高通量篩選的方法，發(fā)現(xiàn)了5個(gè)新型選擇性激酶抑制劑: CHMFL-110，CHMFL-74，CHMFL

3、-155，CHMFL-159，和STK16-IN-1。在經(jīng)過一系列體內(nèi)外藥效學(xué)評(píng)價(jià)后，我們發(fā)現(xiàn):(1) CHMFL-110是一個(gè)靶向c-KIT激酶的高選擇性抑制劑，和已批準(zhǔn)上市的c-KIT抑制劑Imatinib和Sunitninb相比，能夠完全摒除對(duì)ABL和FLT3激酶的脫靶效應(yīng)，并對(duì)胃腸間質(zhì)瘤細(xì)胞GIST-T1和GIST-882的增殖具有明顯的抑制作用(GI50分別為0.021μM和0.043μM)。在動(dòng)物模型體內(nèi)，CHMFL-110

4、表現(xiàn)出良好的藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)和抗腫瘤活性，有進(jìn)一步開發(fā)成為治療胃腸間質(zhì)瘤藥物的潛力。(2)CHMFL-074是靶向Bcr-Abl激酶的選擇性抑制劑，它不僅對(duì)Bcr-Abl靶點(diǎn)的抑制作用比Imatinib強(qiáng)(IC50∶25nM)，而且能夠克服Imatinib耐藥性突變E255K，F(xiàn)317I，F(xiàn)317L，M351T，Q252H，Y253F和F369P，對(duì)Bcr-Abl陽性病人原代細(xì)胞的增殖和動(dòng)物模型體內(nèi)腫瘤的生長(zhǎng)都有較強(qiáng)的抑制效果，是一個(gè)有望

5、應(yīng)用于慢性髓細(xì)胞性白血病的新型激酶抑制劑。(3)CHMFL-155與CHMFL-74的結(jié)構(gòu)類似，但我們發(fā)現(xiàn)，該化合物不僅對(duì)Bcr-Abl靶點(diǎn)活性較高(IC50∶46nM)，對(duì)c-KIT靶點(diǎn)也有較強(qiáng)的抑制作用(IC50∶75nM)，且口服吸收效果良好，可作為Bcr-Abl/c-KIT抑制劑進(jìn)行慢性髓細(xì)胞白血病和胃腸間質(zhì)瘤兩個(gè)方向的藥物開發(fā)。(4) CHMFL-159是一個(gè)靶向PDGFRα的高選擇性抑制劑，不僅對(duì)結(jié)構(gòu)與PDGFRα類似的其他

6、激酶如ABL、c-KIT、FLT3、VEGFR等沒有抑制作用，對(duì)PDGFRβ也有近44倍的選擇性差異。在PDGFRα依賴性細(xì)胞模型EOL-1上，低濃度的CHMFL-159就能夠明顯抑制細(xì)胞增殖及PDGFRα介導(dǎo)的信號(hào)通路，在動(dòng)物模型體內(nèi)，CHMFL-159(100mg/kg/d)的抑瘤率達(dá)到100％，是研究PDGFRα生理和病理功能的有利工具，并有望應(yīng)用于PDGFRα相關(guān)的腫瘤治療上。(5) STK16-IN-1是針對(duì)目前研究較少的ST