腦出血患者急性期血液流變學(xué)指標(biāo)與血漿差異蛋白組學(xué)研究.pdf

1、研究目的：
　　通過觀察急性期腦出血(ICH)患者血液流變學(xué)指標(biāo)的變化規(guī)律及其影響因素，以探討其在腦微循環(huán)障礙中的作用機(jī)制。通過蛋白組學(xué)方法鑒定和定量急性期腦出血患者血漿差異蛋白組學(xué)的表達(dá)變化，闡述相關(guān)差異蛋白質(zhì)的生物學(xué)功能、在不同細(xì)胞信號通路中的作用和功能調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。以期尋找腦出血后誘導(dǎo)腦損傷的分子標(biāo)記物、篩選出特異性功能相關(guān)蛋白，為腦出血提供新的治療靶點(diǎn)。
　　對象與方法：
　　1.實驗對象
　　1.1.采用臨

2、床流行病學(xué)現(xiàn)場調(diào)查研究的方法，選擇2014年1月～2015年5月在江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院、診斷符合腦出血診療指南的80例急性期腦出血患者作為病例組。30例健康體檢者作為對照組。病例組根據(jù)有無高血壓病史、出血量大小、出血部位進(jìn)行分組并分析這些指標(biāo)與血液流變學(xué)的相關(guān)性。
　　1.2.選取2013年11月~2015年05月在江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院和江蘇省中醫(yī)院收治入院的新發(fā)腦出血患者8例（男、女各4例），4名健康者作為對照組，用來研究腦

3、出血組與對照組的血漿差異蛋白的表達(dá)變化及相關(guān)蛋白的功能。
　　2.實驗方法
　　2.1.血液流變學(xué)指標(biāo)檢測
　　所有患者均于入院24 h內(nèi)且未行治療之前、對照組于體檢當(dāng)日空腹采4 ml靜脈血(肝素抗凝），采用LBY-N6B型全自動血液流變分析儀及配套試劑測定全血粘度、血漿粘度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)和紅細(xì)胞變形指數(shù)；采用溫氏法測定紅細(xì)胞壓積；采用魏氏法測定血沉。
　　2.2.血漿差異蛋白組學(xué)測定
　　采集4 ml空

4、腹靜脈血(EDTA抗凝)，分離血漿并分裝，-80度凍存；去除外周血中高豐度蛋白；蛋白質(zhì)的消化和肽段的純化(C18固相萃取小柱)；iTRAQ標(biāo)記蛋白質(zhì)；SCX強(qiáng)陽離子交換柱分離蛋白；反相液相色譜分離、點(diǎn)靶和質(zhì)譜分析；蛋白質(zhì)定性和定量。
　　3.統(tǒng)計學(xué)處理和生物信息學(xué)分析
　　3.1.采用IBM SPSS Statistics22軟件包進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x±s)表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較

5、采用 q檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　3.2.蛋白質(zhì)定量：檢測血漿蛋白組學(xué)的樣本均需與每組的參比值進(jìn)行比較來獲得蛋白質(zhì)的相對表達(dá)量。計量資料以x表示，兩組間計量資料的比較采用單因變量方差分析，取兩組間蛋白質(zhì)表達(dá)量＞1.3倍且P＜0.05的蛋白質(zhì)為差異蛋白。
　　3.2.利用 IPA生物信息學(xué)軟件對差異蛋白進(jìn)行經(jīng)典通路分析、疾病與功能分析、上游調(diào)控因子分析、差異蛋白的相互作用網(wǎng)絡(luò)分析。
　　研究結(jié)果：

6、r>　　1.腦出血患者急性期廣泛存在血液流變學(xué)變化，腦出血組全血粘度(200 s-1, mPa·s、50 s-1, mPa·s和5 s-1, mPa·s)、血漿粘度、血沉均高于對照組且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2.高血壓病史：高血壓性腦出血組中高切粘度和血沉均高于非高血壓性腦出血組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05或0.01)。
　　3.出血量：全血粘度和血漿粘度隨著血腫量增加而升高，全血高切、中切粘度組間差異有

7、統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；紅細(xì)胞聚集指數(shù)和紅細(xì)胞變形指數(shù)隨血腫量增加而下降，紅細(xì)胞聚集指數(shù)在各組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)、而紅細(xì)胞變形指數(shù)在各組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；低切粘度、血漿粘度、HCT和血沉在各組間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　4.出血部位：各組間全血高切粘度(200 s-1, mPa·S)、全血低切粘度(1s-1, mPa·S)、血漿粘度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、血沉各組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義

8、(P＜0.05)，其中全血低切和高切粘度以腦干組最高、小腦組最低，血漿粘度以丘腦組最高、腦干組最低，紅細(xì)胞聚集指數(shù)以腦葉組最高、小腦組最低，血沉以小腦組最高、基底節(jié)組最低；全血粘度(50 s-1, mPa·s)、(5 s-1, mPa·s)、紅細(xì)胞變形能力和HCT在各組間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　5.通過蛋白質(zhì)組學(xué)實驗共鑒定到498個蛋白質(zhì)有詳細(xì)的定量信息，利用Uniprot蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行 GO注釋結(jié)果顯示這些蛋

9、白在分子功能、細(xì)胞成分和生物學(xué)過程中共產(chǎn)生了43種類型的功能蛋白。
　　6.與健康對照組相比，在ICH患者急性期組表達(dá)上調(diào)的差異蛋白有22個，表達(dá)下調(diào)的差異蛋白有14個。
　　7.篩選出7個候選生物學(xué)標(biāo)志物，分別為APCS、FGB、LBP、MGMT、IGFBP2、LYZ、APOA4。
　　8.腦出血急性期的36個血漿差異蛋白共參與了包括LXR/RXR（肝X受體/類視黃醇 X受體）激活通路、FXR/RXR（類法尼醇 X受

10、體/類視黃醇 X受體）激活通路和急性期反應(yīng)信號通路在內(nèi)的多個經(jīng)典信號通路和功能網(wǎng)絡(luò)。
　　結(jié)論：
　　1.急性腦出血患者廣泛存在著血液流變學(xué)異常，提示腦出血急性期血液粘滯度較高，血流動力學(xué)改變與腦出血關(guān)系密切，積極監(jiān)測血液流變學(xué)指標(biāo)并采取相應(yīng)有效措施對預(yù)防和治療腦出血有重要的臨床意義和價值。
　　2.腦出血患者急性期所確定的36個表達(dá)上調(diào)和表達(dá)下調(diào)的差異蛋白可能共同參與和介導(dǎo)了急性期的腦組織損傷過程，這些差異蛋白可能成