Let-7對(duì)wnt信號(hào)通路的表達(dá)調(diào)控研究.pdf

1、渦蟲(chóng)是扁形動(dòng)物門、渦蟲(chóng)綱、兩側(cè)對(duì)稱的真后生動(dòng)物。渦蟲(chóng)體內(nèi)因具有一種干細(xì)胞群（neoblasts）而表現(xiàn)出非常強(qiáng)的再生能力，它對(duì)蟲(chóng)體內(nèi)受到損傷的組織和器官具有替代或修復(fù)作用，即neoblasts可以分化成相應(yīng)的器官或組織。渦蟲(chóng)作為一種經(jīng)典的模式生物用來(lái)研究干細(xì)胞分子機(jī)理和機(jī)體再生。
　　Wnt信號(hào)通路對(duì)渦蟲(chóng)再生的前后軸極性的建立起重要作用，其中通路中的β-catenin蛋白是建立前后軸的關(guān)鍵分子。Wnt信號(hào)通路參與動(dòng)物發(fā)育中的胚胎分

2、化，還與干細(xì)胞的自我更新和增殖密切相關(guān)。
　　MiRNA是一種非編碼小RNA分子，長(zhǎng)度大概為20nt，通過(guò)和其靶基因的互補(bǔ)結(jié)合來(lái)調(diào)控基因表達(dá)，參與多種生理過(guò)程，如疾病形成、再生等。miRNA中目前研究最多的一個(gè)家族是Let-7，它能參與調(diào)控細(xì)胞分化、凋亡和腫瘤發(fā)生等多種生物學(xué)過(guò)程。
　　為了研究let-7對(duì)wnt信號(hào)通路的調(diào)控，本實(shí)驗(yàn)首先對(duì)let-7的功能進(jìn)行研究。過(guò)表達(dá)let-7后發(fā)現(xiàn)渦蟲(chóng)再生時(shí)發(fā)生表型缺陷，這說(shuō)明let-

3、7參與了渦蟲(chóng)的再生；隨后使用原位雜交實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)let-7幾乎分布在渦蟲(chóng)全身，和副胚層干細(xì)胞的分布基本吻合，即從空間上研究了let-7與渦蟲(chóng)再生及干細(xì)胞特性的關(guān)系。頭部marker基因的原位雜交和免疫組化實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證了RNA干擾出現(xiàn)了雙頭，并說(shuō)明了出現(xiàn)雙頭的機(jī)制。因此我們對(duì)參與渦蟲(chóng)再生的let-7通過(guò)軟件預(yù)測(cè)其靶基因，并在mRNA水平上利用熒光定量PCR和構(gòu)建熒光蛋白表達(dá)載體的方法驗(yàn)證了靶基因預(yù)測(cè)結(jié)果的正確性；蛋白水平的western b