油橄欖葉中三種活性成分含量動(dòng)態(tài)變化及橄欖苦苷的分離鑒定與活性研究.pdf

1、油橄欖（Olea europaea L.）為木犀科（Oleaceae）木犀欖屬（Olea）常綠喬木，是世界上著名的亞熱帶木本油料樹種。不僅其果富含高不飽和脂肪酸的油脂和豐富的酚類物質(zhì)，且葉中含有與果實(shí)類似甚至含量更高的活性酚類物質(zhì)，具有重要的研究前景和應(yīng)用價(jià)值。由于我國油橄欖種植起步較晚，目前對其研究主要集中在種質(zhì)資源和果實(shí)方面，而對其葉的研究和利用相對更加滯后。在油橄欖種植地，每年修剪和采摘果實(shí)季節(jié)產(chǎn)生的大量枝葉絕大多數(shù)被廢棄，造成資

2、源浪費(fèi)。為此，本文對西昌油橄欖葉中總酚、總黃酮和橄欖苦苷的含量動(dòng)態(tài)變化以及橄欖苦苷的分離、鑒定和體外活性進(jìn)行了研究，為油橄欖品種的選育及油橄欖葉的綜合開發(fā)利用提供參考，這對提高果農(nóng)的生產(chǎn)收益，促進(jìn)我國油橄欖產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展具有重要意義。其主要研究結(jié)果如下:
　　1.采用福林酚法、三氯化鋁法和紫外-可見光譜差減法分別測定了西昌29個(gè)油橄欖品種葉中總酚、總黃酮和橄欖苦苷一年內(nèi)不同時(shí)期的含量。結(jié)果表明，不同品種不同月份間油橄欖葉中總酚、總

3、黃酮和橄欖苦苷含量差異較大:全年內(nèi)，坦彩的總酚含量最高(37.20％)，同時(shí)也出現(xiàn)含量最低(14.20％)的品種，但巴利亞的年平均含量最高(30.06％);切姆阿爾的總黃酮含量最高(1.39％)，云臺最低(0.30％)，但奧托卡的年平均含量最高(0.82％);小蘋果的橄欖苦苷含量最高(19.57％)，美蘭開最低(1.56％)，但巴利亞的年平均含量最高(13.64％)。全年內(nèi)，29個(gè)油橄欖品種葉中總酚于1月份含量最高，9月份含量最低;橄欖

4、苦苷在1月份含量最高，7月份含量最低;總黃酮在4月份含量最高，7月份含量最低。總體變化趨勢為冬春季含量偏高，夏秋季含量偏低。
　　2.分別以80％甲醇、80％乙醇、丙酮、乙酸乙酯、水作為提取溶劑，采用超聲波輔助法對油橄欖葉中活性成分進(jìn)行提取，并對各溶劑提取物的體外活性和化學(xué)成分進(jìn)行了分析。結(jié)果表明:各溶劑提取物均具有較強(qiáng)的抑菌和抗氧化活性，其中80％甲醇提取物的抑菌和抗氧化活性均最強(qiáng)，乙酸乙酯提取物的抗氧化活性最弱，而水提取物的抑

5、菌活性最弱。經(jīng)液相色譜-質(zhì)譜法(LC-MS)分析顯示:水提取物和醇提取物中化合物種類較多，而丙酮提取物和乙酸乙酯提取物中化合物較少。在各溶劑提取物中均含橄欖苦苷和Ligstroside2種成分，除水提取物外其他溶劑提取的橄欖苦苷含量較高，而水提取物中特有脫乙酰-10-羥基橄欖苦苷甘元和10-羥基橄欖苦苷2種物質(zhì)。
　　3.以80％甲醇為提取溶劑，采用超聲波輔助法對油橄欖葉進(jìn)行提取，提取液依次經(jīng)過石油醚和乙酸乙酯多次萃取、濃縮、硅膠

6、柱層析、再濃縮、真空干燥，獲得橄欖苦苷純樣;經(jīng)紫外可見光譜(UV)、紅外光譜(IR)、核磁共振(NMR)和質(zhì)譜(MS)分析，以橄欖苦苷標(biāo)準(zhǔn)品為對照，確定提純樣品為橄欖苦苷。HPLC分析顯示，純樣品得率為13.52％，樣品純度達(dá)96.54％，純化率為78.49％。
　　4.以Vc和BHT作為陽性對照，采用5種方法綜合評價(jià)橄欖苦苷的體外抗氧化活性。結(jié)果顯示:橄欖苦苷具有較強(qiáng)的抗氧化活性，其活性緊次于Vc，且總抗氧化能力、總還原能力和亞

7、硝酸鹽清除能力均強(qiáng)于BHT，而自由基清除能力與BHT相當(dāng)。因此，橄欖苦苷可以作為更好的、安全的、天然的抗氧化劑、食品添加劑或者防腐劑等廣泛被開發(fā)和應(yīng)用。
　　5.采用濾紙片法考察了橄欖苦苷對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌的抑制作用，用稀釋法分析了橄欖苦苷對這3種細(xì)菌生長曲線的影響及其最低抑菌濃度(MIC)。結(jié)果表明:橄欖苦苷具有較強(qiáng)的抑菌活性，對大腸桿菌抑制作用最強(qiáng)，MIC為0.025 mg/mL;其次為金黃色葡萄球菌，M