橄欖苦苷大鼠體內(nèi)藥代動力學(xué)研究.pdf

1、乙型肝炎是威脅人類健康的主要疾病。由于乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus,HBV)進入肝細(xì)胞后,產(chǎn)生的cccDNA對各種藥物的耐受性以及長期用藥導(dǎo)致的HBV突變株的產(chǎn)生,使得到目前為止,人類還沒有找到一種理想的抗HBV藥物。從具有較強的抗HBV活性的天然藥物中分離提取抗HBV活性單體成分,研究其構(gòu)效關(guān)系,并進行人工合成,是目前抗HBV藥物研發(fā)的熱點之一。
　　橄欖苦苷作為本研究前期從抗HBV活性好、毒性低的中草藥素馨花7

2、0％乙醇提取物中分離得到環(huán)烯醚萜苷類化合物,該物質(zhì)體內(nèi)外抗HBV活性明確,在素馨花藥材中含量豐富(初步估算超過5%),易于分離純化,有望成為新型抗HBV活性先導(dǎo)化合物,但目前尚缺乏動物體內(nèi)藥代動力學(xué)資料支持,其代謝產(chǎn)物研究也少見文獻報道。因此我們將橄欖苦苷進一步進行了藥代動力學(xué)方面的研究和探討。
　　第一部分:素馨花中橄欖苦苷的富集提取
　　目的:
　　從素馨花中分離提純得到橄欖苦苷
　　方法:
　　用聚酰

3、胺樹脂富集分離橄欖苦苷,即以聚酰胺為分離載體,樣品濃度為1g/mL,上樣量為干浸膏(g)/聚酰胺(g)=1:10,上樣后靜態(tài)吸附2h,先用3BV蒸餾水洗脫雜質(zhì),再用15%乙醇溶液洗脫,以高效液相色譜法測定橄欖苦苷含量。
　　結(jié)果:
　　經(jīng)含量測定,所得樣品中橄欖苦苷含量大于80%
　　結(jié)論:
　　所得樣品中橄欖苦苷含量大于80%,可用于藥代動力學(xué)研究
　　第二部分:橄欖苦苷內(nèi)標(biāo)物及高效液相色譜條件研究

4、>　　目的:確定HPLC法測定橄欖苦苷血藥濃度時內(nèi)標(biāo)物及色譜條件。
　　方法:用紫外分光光度計對橄欖苦苷、黃芩苷、沒食子酸、綠原酸等標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進行全波長掃描確定檢測波長,用正交試驗法設(shè)計實驗,測定不同色譜條件下,各個標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的保留時間,峰寬,計算分離度,根據(jù)分離度及保留時間,確定最優(yōu)色譜條件及內(nèi)標(biāo)物。
　　結(jié)果:在正交試驗中,色譜柱不同水平間的F=39.50,流動相不同水平間的F=48.19,均大于F0.05(2,2)=19,

5、P<0.05,存在明顯差異,具有統(tǒng)計學(xué)意義,不同標(biāo)準(zhǔn)品間無明顯差異。
　　結(jié)論正交設(shè)計中,橄欖苦苷最優(yōu)色譜條件為色譜柱:AgilentZORBAXEclipseXDB-C184.6×150mm5μm,流動相:水—甲醇—甲酸60:40:1,內(nèi)標(biāo)物為黃芩苷。
　　第三部分:橄欖苦苷的體內(nèi)方法學(xué)考察
　　目的:建立測定大鼠血漿中橄欖苦苷濃度的HPLC方法。
　　方法:將橄欖苦苷配置成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,加入空白血漿,以黃

6、芩苷為內(nèi)標(biāo)物,應(yīng)用HPLC法檢測血漿中橄欖苦苷濃度
　　結(jié)果:應(yīng)用選定的色譜條件檢測,在大鼠空白血漿樣品中,橄欖苦苷的線性范圍為5.25-31.5μg/mL,最低檢測濃度為5.25μg/mL。低、中、高濃度的QC樣品中,日內(nèi)精密度RSD分別為2.7%,9.7%,6.9%;日間精密度RSD分別為3.1%,9.3%,8.7%;準(zhǔn)確度RE分別為-4.0%,7.5%,3.7%;提取回收率分別為95.9%,107.5%,100.4%,RSD

7、分別為3.1%,8.0%,9.3%;穩(wěn)定性結(jié)果表明血漿中橄欖苦苷三天內(nèi)穩(wěn)定。
　　結(jié)論:該方法靈敏,簡便,選擇性強,適用于橄欖苦苷血藥濃度的測定,及其藥代動力學(xué)研究
　　第四部分:橄欖苦苷藥代動力學(xué)研究
　　目的:橄欖苦苷在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)研究
　　方法:wistar大鼠,隨機分為橄欖苦苷100,200,400mg/kg劑量組,ig給藥,藥后不同時間采血,離心,血漿經(jīng)甲醇-乙腈沉淀蛋白后,HPLC法測定不同時

8、間點大鼠血漿中橄欖苦苷的含量。各給藥組平均血藥濃度—時間數(shù)據(jù)應(yīng)用3p97軟件進行藥代動力學(xué)參數(shù)分析,組間藥動學(xué)參數(shù)用spss17.0軟件進行統(tǒng)計分析
　　結(jié)果:橄欖苦苷在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)過程符合二室模型,低、中、高劑量組的t1/2,CL/F,AUC差異具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義,其中t1/2,CL/F隨給藥劑量的增大而增大,AUC隨劑量的增大,呈現(xiàn)先減小后增大的趨勢。
　　結(jié)論:橄欖苦苷在在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)過程符合二室模型