肝癌細(xì)胞MGMT表達(dá)水平與奧沙利鉑敏感性的相關(guān)性.pdf

1、目的:探討肝癌細(xì)胞MGMT表達(dá)水平與OXA敏感性的相關(guān)性。
　　方法:采用體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞株Bel-7402、SMMC-7721、HUH-7。用RT-PCR法檢測MGMT的mRNA表達(dá)水平；Western-Blot方法檢測MGMT蛋白的基礎(chǔ)表達(dá)水平；MTT法計(jì)算各肝癌細(xì)胞的IC50；對比肝癌細(xì)胞MTT，并通過甲基化特異性PCR，檢測所有細(xì)胞的MGMT甲基化的狀態(tài)；Western-Blot方法檢測加OXA后r-H2Ax的表達(dá)來評價D

2、NA損傷程度；流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)果:各肝癌細(xì)胞系均可檢測到MGMT基因和蛋白的表達(dá)，其中HUH-7 MGMT的mRNA以及蛋白水平最高；而Bel-7402的MGMT的mRNA以及蛋白水平最低，且三者的MGMT蛋白水平與mRNA水平呈正相關(guān)。根據(jù)MTT結(jié)果計(jì)算出HuH-7、SMMC-7721、Bel-7402對OXA的IC50分別為246.76μg/ml、48.43μg/ml以及31.35μg/ml，根據(jù)相關(guān)性分析得出

3、MGMT的mRNA及蛋白表達(dá)水平與IC50呈正相關(guān)，即MGMT表達(dá)水平越高，其IC50值越大。MGMT的甲基化結(jié)果顯示HuH-7的MGMT的甲基化表達(dá)水平最低，Bel-7402的MGMT的甲基化表達(dá)水平最高，根據(jù)相關(guān)性分析得出MGMT啟動子甲基化水平與MGMT的mRNA與蛋白水平以及IC50呈負(fù)相關(guān)。加OXA12h后r-H2Ax均有不同程度表達(dá)，其中Bel-7402的r-H2Ax升高最明顯而HuH-7升高最少。流式細(xì)胞儀檢測凋亡，顯示加