20(S)-人參皂苷Rg3對(duì)肝癌細(xì)胞銅轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)蛋白介導(dǎo)的奧沙利鉑敏感性影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，探討20(S)-人參皂苷Rg3對(duì)銅轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)蛋白介導(dǎo)的奧沙利鉑藥物敏感性的影響以及相關(guān)機(jī)制，以期為提高奧沙利鉑療效和優(yōu)化中西醫(yī)結(jié)合治療肝癌方案提供一定參考。
　　方法:以人肝癌MHCC97H細(xì)胞株為觀察對(duì)象，采用MTT法檢測(cè)MHCC97H細(xì)胞對(duì)20(S)-人參皂苷Rg3、奧沙利鉑的藥物敏感性;根據(jù)藥物對(duì)細(xì)胞增殖的抑制情況和藥物敏感性實(shí)驗(yàn)研究要求，計(jì)算出兩藥聯(lián)合所需的適宜濃度，再用MTT法檢測(cè)MHCC97H細(xì)胞對(duì)奧

2、沙利鉑聯(lián)合低濃度20(S)-人參皂苷Rg3后的敏感性變化，并通過(guò)計(jì)算q值判斷藥物聯(lián)合效果和選擇進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法(Real-time PolymeraseChain Reaction，RT-PCR)檢測(cè)各組MHCC97H細(xì)胞中Ctr1、Atox1、ATP7A和ATP7B的mRNA表達(dá)情況;蛋白免疫印跡法(Western blotting)檢測(cè)各組MHCC97H細(xì)胞中Ctr1、Atox1、ATP7A和ATP7B

3、的蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果:在MTT檢測(cè)法的實(shí)驗(yàn)中，結(jié)果顯示20(S)-人參皂苷Rg3、奧沙利鉑兩種單藥分別對(duì)MHCC97H細(xì)胞增殖具有顯著抑制作用(P＜0.05)，并且對(duì)MHCC97H細(xì)胞增殖的抑制作用表現(xiàn)出劑量和時(shí)間依賴性。接近20(S)-人參皂苷Rg3最大無(wú)毒性劑量的濃度為100μM，不同濃度的奧沙利鉑與之聯(lián)合后對(duì)人肝癌MHCC97H細(xì)胞增殖的抑制作用明顯增強(qiáng)(P＜0.05)，q值顯示奧沙利鉑與低濃度20(S)-人參皂苷Rg

4、3的聯(lián)合效果均表現(xiàn)為協(xié)同或相加作用。RT-PCR法和Western blotting法檢測(cè)不同濃度奧沙利鉑與低濃度20(S)-人參皂苷Rg3(100μM)聯(lián)合后各組MHCC97H細(xì)胞中Ctr1、Atox1、ATP7A、ATP7B表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn):(1)與對(duì)照組相比，奧沙利鉑單藥組、奧沙利鉑與20(S)-人參皂苷Rg3聯(lián)合組中的Ctr1mRNA和蛋白表達(dá)下降(P＜0.05)，20(S)-人參皂苷Rg3組的Ctr1mRNA和蛋白表達(dá)無(wú)明顯

5、變化;但是與奧沙利鉑單藥組比較，聯(lián)合組中的Ctr1mRNA和蛋白表達(dá)升高（P＜0.05）;(2)奧沙利鉑單藥組、聯(lián)合組的Aox1mRNA和蛋白表達(dá)與對(duì)照組相比無(wú)明顯變化(P＞0.05);(3)聯(lián)合組與奧沙利鉑單藥組相比，該組中ATP7A和ATP7B的mRNA和蛋白表達(dá)均顯著下降(P＜0.05)，而奧沙利鉑單藥組與對(duì)照組相比無(wú)明顯變化（P＞0.05），聯(lián)合組比空白對(duì)照組降低(P＜0.05)。
　　結(jié)論:20(S)-人參皂苷Rg3、奧