20(S)-人參皂苷Rg3對肝癌細胞銅轉運相關蛋白介導的奧沙利鉑敏感性影響的實驗研究.pdf

1、目的:通過細胞實驗，探討20(S)-人參皂苷Rg3對銅轉運相關蛋白介導的奧沙利鉑藥物敏感性的影響以及相關機制，以期為提高奧沙利鉑療效和優(yōu)化中西醫(yī)結合治療肝癌方案提供一定參考。
　　方法:以人肝癌MHCC97H細胞株為觀察對象，采用MTT法檢測MHCC97H細胞對20(S)-人參皂苷Rg3、奧沙利鉑的藥物敏感性;根據藥物對細胞增殖的抑制情況和藥物敏感性實驗研究要求，計算出兩藥聯(lián)合所需的適宜濃度，再用MTT法檢測MHCC97H細胞對奧

2、沙利鉑聯(lián)合低濃度20(S)-人參皂苷Rg3后的敏感性變化，并通過計算q值判斷藥物聯(lián)合效果和選擇進行后續(xù)實驗。應用實時熒光定量聚合酶鏈式反應法(Real-time PolymeraseChain Reaction，RT-PCR)檢測各組MHCC97H細胞中Ctr1、Atox1、ATP7A和ATP7B的mRNA表達情況;蛋白免疫印跡法(Western blotting)檢測各組MHCC97H細胞中Ctr1、Atox1、ATP7A和ATP7B

3、的蛋白表達情況。
　　結果:在MTT檢測法的實驗中，結果顯示20(S)-人參皂苷Rg3、奧沙利鉑兩種單藥分別對MHCC97H細胞增殖具有顯著抑制作用(P＜0.05)，并且對MHCC97H細胞增殖的抑制作用表現出劑量和時間依賴性。接近20(S)-人參皂苷Rg3最大無毒性劑量的濃度為100μM，不同濃度的奧沙利鉑與之聯(lián)合后對人肝癌MHCC97H細胞增殖的抑制作用明顯增強(P＜0.05)，q值顯示奧沙利鉑與低濃度20(S)-人參皂苷Rg

4、3的聯(lián)合效果均表現為協(xié)同或相加作用。RT-PCR法和Western blotting法檢測不同濃度奧沙利鉑與低濃度20(S)-人參皂苷Rg3(100μM)聯(lián)合后各組MHCC97H細胞中Ctr1、Atox1、ATP7A、ATP7B表達情況，結果發(fā)現:(1)與對照組相比，奧沙利鉑單藥組、奧沙利鉑與20(S)-人參皂苷Rg3聯(lián)合組中的Ctr1mRNA和蛋白表達下降(P＜0.05)，20(S)-人參皂苷Rg3組的Ctr1mRNA和蛋白表達無明顯

5、變化;但是與奧沙利鉑單藥組比較，聯(lián)合組中的Ctr1mRNA和蛋白表達升高（P＜0.05）;(2)奧沙利鉑單藥組、聯(lián)合組的Aox1mRNA和蛋白表達與對照組相比無明顯變化(P＞0.05);(3)聯(lián)合組與奧沙利鉑單藥組相比，該組中ATP7A和ATP7B的mRNA和蛋白表達均顯著下降(P＜0.05)，而奧沙利鉑單藥組與對照組相比無明顯變化（P＞0.05），聯(lián)合組比空白對照組降低(P＜0.05)。
　　結論:20(S)-人參皂苷Rg3、奧