宮頸癌細(xì)胞系RRM1表達(dá)水平與細(xì)胞對(duì)吉西他濱敏感性的相關(guān)研究.pdf

1、目的: 宮頸癌是危及婦女健康的第二大惡性腫瘤，化療是宮頸癌綜合治療的一種重要手段。吉西他濱(gemcitabine，GEM)是近年來(lái)用于宮頸癌治療的新型化療藥物，核糖核苷酸還原酶亞單位M1(ribonucleotide reductase subunit M1，RRM1)是GEM在細(xì)胞內(nèi)作用的靶點(diǎn)。本研究通過(guò)探討宮頸癌細(xì)胞系RRM1表達(dá)水平與細(xì)胞對(duì)GEM敏感性的關(guān)系，并尋求逆轉(zhuǎn)耐藥的方法，以期為指導(dǎo)臨床宮頸癌GEM個(gè)體化化療提供理論依據(jù)

2、。 方法: 采用MTT法檢測(cè)3種宮頸癌細(xì)胞系C33a、Hela、CaSki對(duì)GEM、DDP及GEM+DDP的敏感性，RT-PCR、Western Blot檢測(cè)各細(xì)胞系的RRM1表達(dá)水平；對(duì)Hela進(jìn)行GEM誘導(dǎo)耐藥培養(yǎng)，檢測(cè)耐藥細(xì)胞的耐藥指數(shù)及RRM1表達(dá)水平的變化；對(duì)CaSki進(jìn)行RRM1—siRNA轉(zhuǎn)染，檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞RRM1表達(dá)水平及對(duì)GEM的敏感性的變化；收集相同濃度DDP不同作用時(shí)間及不同濃度DDP相同作用時(shí)間下的兩

3、組CaSki細(xì)胞，檢測(cè)DDP作用后細(xì)胞RRM1蛋白表達(dá)水平的變化，流式細(xì)胞儀檢測(cè)DDP、GEM單獨(dú)及聯(lián)合用藥下細(xì)胞周期的變化及細(xì)胞凋亡情況。 結(jié)果: 3種宮頸癌細(xì)胞系C33a、Hela、CaSki在GEM作用下72小時(shí)的IC50分別為0.58μM、1.43μM、14.39μM，在DDP作用下72小時(shí)的IC50分別為3.91μM、3.09μM、3.82μM。C33aRRM1表達(dá)水平相對(duì)最低，CaSki相對(duì)最高，Hela居中。DDP

4、與GEM聯(lián)合作用于CaSki有藥物協(xié)同作用。GEM誘導(dǎo)耐藥培養(yǎng)獲得的Hela耐藥細(xì)胞的耐藥指數(shù)為3.6，其RRM1 mRNA及蛋白表達(dá)水平均上升。RRM1—siRNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染CaSki細(xì)胞48小時(shí)后檢測(cè)細(xì)胞RRM1表達(dá)水平下降，隨著RRM1—siRNA濃度的增加，RNA干擾效應(yīng)增強(qiáng)，同時(shí)CaSki對(duì)GEM的敏感性增加。隨著DDP作用濃度的增加及作用時(shí)間的延長(zhǎng)出現(xiàn)CaSkiRRM1表達(dá)的增強(qiáng)。GEM單用或DDP與GEM聯(lián)合作用下均出現(xiàn)細(xì)胞

5、S期阻滯，沒有顯著差異(P=0.205)，但聯(lián)合用藥時(shí)細(xì)胞凋亡增加(P＝0.035)。 結(jié)論: 宮頸癌細(xì)胞系對(duì)GEM的反應(yīng)存在著異質(zhì)性，宮頸癌細(xì)胞系RRM1表達(dá)水平與細(xì)胞對(duì)GEM的敏感性呈負(fù)相關(guān)。通過(guò)GEM的誘導(dǎo)耐藥，細(xì)胞在獲得耐藥的同時(shí)RRM1表達(dá)增高。細(xì)胞RRM1表達(dá)增高與GEM繼發(fā)耐藥有關(guān)。RRM1—siRNA干擾可下調(diào)細(xì)胞RRM1表達(dá)，逆轉(zhuǎn)細(xì)胞GEM耐藥。DDP與GEM在體外實(shí)驗(yàn)存在藥物協(xié)同作用，作用機(jī)制與RRM1表達(dá)無(wú)