食管鱗癌細(xì)胞系RRM1表達(dá)水平與細(xì)胞對(duì)吉西他濱敏感性的相關(guān)研究.pdf

1、目的：對(duì)化療藥物原發(fā)或繼發(fā)耐藥是導(dǎo)致食管癌化療失敗的主要因素，我們檢測(cè)食管鱗癌細(xì)胞系對(duì)GEM的敏感性，重點(diǎn)探討GEM在細(xì)胞內(nèi)的作用靶點(diǎn)-RRM1表達(dá)水平對(duì)GEM療效的影響，并進(jìn)一步探索逆轉(zhuǎn)耐藥的方法。 材料與方法：我們培養(yǎng)4個(gè)食管鱗癌細(xì)胞系，包括Eca-109、Kyse-150、Kyse-450和9706，采用細(xì)胞毒性試驗(yàn)結(jié)合蛋白印跡法和RT-PCR，初步分析各細(xì)胞系的RRM1表達(dá)水平與細(xì)胞對(duì)GEM敏感性的關(guān)系；使用50 nM

2、GEM持續(xù)培養(yǎng)Kyse-450，監(jiān)測(cè)在GEM篩選相對(duì)耐藥細(xì)胞的過(guò)程中的RRM1表達(dá)水平的變化；采用RNAi降低RRM1表達(dá)水平后檢測(cè)細(xì)胞對(duì)GEM敏感性的改變。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS11.5，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，藥物敏感性交化采用t檢驗(yàn)。 結(jié)果：GEM主要作用于S期，與增加藥物濃度相比，延長(zhǎng)GEM的作用時(shí)間對(duì)凋亡的影響更為顯著(P=0.014)。食管鱗癌細(xì)胞對(duì)GEM相對(duì)敏感，但各細(xì)胞系之間對(duì)GEM的敏感性相差較大，Eca-109

3、、Kyse-150、Kyse-450和9706在GEM作用48小時(shí)的IC50值分別為0.92mM、0.48mM、0.29mM和0.02mM，其中最耐藥(Eca-109)和最敏感的細(xì)胞系(9706)之間的IC50相差46倍；而各細(xì)胞系之間對(duì)DDP的敏感性相差較小(10倍)，細(xì)胞對(duì)GEM或DDP的敏感性與該細(xì)胞的RRM1表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)；使用50nM的GEM持續(xù)培養(yǎng)Kyse-450，流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示隨著GEM培養(yǎng)天數(shù)的增加，細(xì)胞凋亡比

4、例逐漸增高，第0、3、7、10、13和16天凋亡細(xì)胞比例分別為1.57％、1.92％、2.95％、11.60％、16.30％和29.20％，同期存活細(xì)胞的RRM1蛋白水平也逐漸增高，第16天達(dá)到最高；RRM1 siRNA可以下調(diào)Kyse-450的RRM1表達(dá)水平，并且能夠顯著增加細(xì)胞對(duì)GEM的敏感性(P=0.035)，轉(zhuǎn)染RRM1 siRNA的細(xì)胞與母細(xì)胞系相比，其對(duì)GEM的敏感性增加了4.26倍。 結(jié)論：食管鱗癌細(xì)胞的RRM1